Меню Рубрики

Реакция кумбса при бруцеллезе

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Возбудителями бруцеллеза являются бактерии из рода Бруцелла (Brucella), основным местом обитания которых являются домашние и дикие животные. У животных данные микроорганизмы не вызывают явной клинической картины заболевания, однако могут приводить к массовым абортам и другим патологиям. Науке известно 6 видов бруцелл, однако патологию у человека могут вызывать 4 из них.

Опасными для человека являются:

  • B. melitensis – основными хозяевами являются овцы, козы и другой мелкий рогатый скот.
  • B. abortus – развивается преимущественно у крупного рогатого скота.
  • B. suis – характерна для свиней и диких животных (зайцев, оленей).
  • B. canis – основным резервуаром являются собаки.

Все виды бруцелл характеризуются высокой инвазивной способностью, то есть могут легко проникать в организм человека через слизистые оболочки или поврежденные кожные покровы. Хотя бруцеллы и считаются внутриклеточными паразитами (развиваются внутри клеток организма-хозяина), они могут длительное время находиться вне клеток. Также они являются достаточно устойчивыми во внешней среде, однако могут быть уничтожены при воздействии различных химических и физических факторов.

Бруцеллы могут выживать:

  • В воде – до 2 месяцев.
  • В сыром мясе – до 3 месяцев.
  • В шерсти животных – до 4 месяцев.
  • При температуре 60 градусов – до 30 минут.

При кипячении данные микроорганизмы погибают практически моментально, так же как при воздействии различных дезинфицирующих растворов (0,2 – 1% раствора хлорной извести, хлорамина и так далее).

Больные бруцеллезом люди друг для друга не заразны, то есть заразиться данной инфекцией человек может только от животного.

От животного к человеку бруцеллез может передаваться:

  • Фекально-оральным (пищевым) путем. Это основной путь инфицирования, при котором бактерии проникают в организм человека через слизистые оболочки пищеварительной системы (при контакте человека с мочой или калом зараженных животных и несоблюдении правил личной гигиены). Также человек может заразиться при употреблении в пищу молока, сыра, брынзы, плохо обработанного (термически) мяса и других продуктов животного происхождения.
  • Контактно-бытовым путем. Характеризуется проникновением бактерий в человеческий организм через поврежденные кожные покровы или слизистые оболочки. Больные животные обсеменяют (заражают) бактериями практически всю окружающую их обстановку – подстилки, воду, землю. Вот почему работающему с животными человеку заразиться бруцеллезом довольно просто (например, при уборке загонов для животных и несоблюдении правил личной гигиены, при работе с овечьей шерстью и так далее).
  • Аэрогенным путем. В данном случае человек вдыхает микрочастицы пыли или шерсти, на которых располагаются бруцеллы. Данные микрочастицы задерживаются на слизистой оболочке верхних дыхательных путей, откуда возбудитель и проникает в организм.

Стоит отметить, что бруцеллез распространен практически повсеместно. Тем не менее, в группу риска входят люди, занятые животноводством (пастухи, доярки), а также работники мясокомбинатов. Иммунитет после перенесенной инфекции сохраняется в течение 6 – 12 месяцев, после чего возможно повторное инфицирование.

Как говорилось ранее, бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки либо через поврежденные кожные покровы (при этом повреждения не обязательно должны быть массивными и заметными, иногда достаточно микротрещин, имеющихся на руках практически любого работника сельского хозяйства). Важно отметить, что в месте внедрения бруцелл не остается никаких видимых следов или патологических изменений, поэтому определить точное время инфицирования бывает довольно сложно.

После проникновения в организм человека бруцеллы проходят через несколько последовательных стадий развития, что и обуславливает клинические проявления заболевания.

В развитии бруцеллеза выделяют несколько фаз, а именно:

  • Лимфогенную фазу. Сразу после попадания в ткани организма бруцеллы проникают в лимфатическую систему и с током лимфы заносятся в регионарные лимфатические узлы. Лимфоузлы представляют собой своеобразные фильтры, состоящие из большого количества лимфоцитов (клеток иммунной системы). Данные фильтры задерживают все патогенные микроорганизмы и другие чужеродные частицы, проникающие в них из тканей. Проникшие в организм бруцеллы также задерживаются в лимфоузлах и взаимодействуют с лимфоцитами, стимулируя их усиленное деление.
  • Фазу первичной латенции. В этой фазе происходит размножение бруцелл в лимфатических узлах, а также активация иммунитета и усиленное деление лимфоцитов в ответ на проникновение чужеродных агентов (то есть организм начинает бороться с инфекцией). Первые две фазы бруцеллеза соответствуют латентному (скрытому) течению заболевания, когда никаких клинических проявлений не наблюдается.
  • Фазу гематогенного заноса. На данном этапе бактерии прорывают лимфатический барьер и поступают в кровь. Выделение ими токсических веществ, а также активация иммунной системы обуславливают развитие клинических проявлений острого бруцеллеза.
  • Фазу поражения различных органов и систем. С током крови бактерии разносятся по многим органам и тканям, где поглощаются особыми клетками иммунной системы (макрофагами), целью которых является уничтожить (переварить с помощью различных ферментов) чужеродные агенты. Однако макрофаги не могут полностью «переварить» бруцеллы, которые продолжают развиваться внутри них. В результате этого в различных тканях и органах образуются так называемые гранулемы, состоящие из поглотивших бруцеллы макрофагов и окружающих их клеток иммунной системы. Со временем макрофаг погибает, а возбудитель инфекции высвобождается в окружающие ткани и вновь поступает в кровоток, что обуславливает повторные случаи обострения заболевания.
  • Фазу реактивно-аллергических изменений. В результате длительного присутствия патогенных агентов в организме происходит патологическая перестройка иммунной системы. Иммунные реакции становятся более выраженными, что само по себе начинает оказывать повреждающее действие на различные ткани и органы.

Симптомы бруцеллеза во многом зависят от стадии его развития, от состояния иммунной системы больного, а также от первоначально попавшей в организм дозы возбудителя (чем она выше, тем быстрее и возникнут и тем выраженнее будут клинические проявления заболевания). Также стоит отметить, что большинство тяжелых форм бруцеллеза обусловлено B. melitensis, которой человек может заразиться от мелкого рогатого скота.

Клиническими проявлениями бруцеллеза могут быть:

  • повышение температуры тела;
  • увеличение лимфатических узлов;
  • поражения костей;
  • поражения суставов;
  • поражения легких;
  • поражения сердечно-сосудистой системы;
  • поражения нервной системы;
  • поражения половой системы;
  • поражения глаз.

Скорость развития и выраженность лихорадки при бруцеллезе определяется видом возбудителя, а также его первоначальной дозой. В большинстве случаев в течение нескольких дней после инфицирования у больных может отмечаться незначительный субфебрилитет (повышение температуры тела до 37 – 37,5 градусов), сопровождающийся другими неспецифическими признаками инфекции (общей слабостью, повышенной утомляемостью, головными болями и мышечными болями, болями в суставах, ломотой во всем теле и так далее). Данные симптомы прогрессируют в течение нескольких дней (пока бруцеллы размножаются в лимфатических узлах), после чего температура тела может подниматься до 38 – 39 градусов, что обычно сопровождается ознобом, проливным потом и ухудшением общего самочувствия.

Лихорадка при бруцеллезе характеризуется волнообразным течением, то есть продолжается в течение нескольких дней, после чего на некоторое время стихает, а затем вновь возобновляется (периоды обострения в данном случае связаны с разрушением макрофагов и поступлением большого количества бруцелл в кровоток).

В течение инкубационного периода патологических изменений в лимфатических узлах и лимфатических сосудах обычно не наблюдается. Генерализованное (повсеместное) увеличение периферических лимфатических узлов может отмечаться на ранних стадиях заболевания, что обусловлено проникновением бактерий в кровь и разносом их по всему организму. Лимфоузлы при этом увеличиваются до 5 – 7 мм в диаметре, становятся плотными и слегка болезненными при пальпации (прощупывании). Кожа над ними обычно не изменена. Особенно четко патологические изменения могут определяться в шейных, подмышечных и паховых группах лимфатических узлов.

Также стоит отметить, что у большинства пациентов при бруцеллезе отмечается увеличение печени и селезенки, что обусловлено проникновением и развитием бруцелл в мелких кровеносных сосудах данных органов.

При длительном течении заболевания в патологический процесс вовлекается все больше групп лимфоузлов, которые со временем могут разрушаться и замещаться соединительной (рубцовой) тканью, утрачивая в результате этого свою функциональную активность.

Поражение опорно-двигательного аппарата (как и других органов и тканей) возникает в результате проникновения бруцелл в ткани суставов и костей с последующим развитием в них инфекционно-воспалительных процессов и образованием гранулем. Данные гранулемы со временем могут замещаться фиброзной рубцовой тканью, что приведет к необратимому нарушению структуры и функции пораженного органа. Наблюдаются данные явления при подостром или хроническом течении заболевания.

Для бруцеллеза характерно возникновение:

  • Артритов.Артриты (воспаления суставов) при бруцеллезе множественные, то есть одновременно поражаются сразу несколько суставов во всем организме (вначале мелкие суставы кистей и стоп, затем более крупные). Артриты возникают при проникновении бруцелл в суставные полости и поражении внутрисуставных структур (синовиальной оболочки, суставных поверхностей хрящей и так далее). Проявляется артрит выраженными болями и ограничением подвижности в пораженных суставах, возникающими в результате прогрессирования воспалительного процесса. Кожа над пораженным суставом при этом может быть отечной, припухшей, гиперемированной (красного цвета) и сильно болезненной при прикосновении или при движении.
  • Периартритов. Периартрит характеризуется воспалением околосуставных компонентов (капсулы сустава, околосуставных связок и так далее), что клинически проявляется болями и нарушением подвижности в суставе (более выраженными, чем при простом артрите).
  • Бурситов.Бурсит – это воспаление синовиальной оболочки, которая выстилает внутреннюю поверхность суставной полости. В нормальных условиях синовиальная оболочка продуцирует определенное количество синовиальной жидкости, которая питает суставные хрящи и облегчает скольжение их друг относительно друга во время движений. При бурсите количество образующейся жидкости значительно возрастает. В результате этого она скапливается в полости сустава, обуславливая повышение внутрисуставного давления, нарушение подвижности и возникновение болей.
  • Тендовагинитов. Данным термином обозначается воспаление внутренней оболочки синовиальных влагалищ мышечных сухожилий, что обычно наблюдается в области кистей и стоп. В нормальных условиях данные влагалища окружают сухожилия, обеспечивая их свободное скольжение во время мышечного сокращения (это осуществляется благодаря наличию в них синовиальной жидкости). При развитии тендовагинита стенки влагалищ утолщаются, а количество продуцируемой жидкости возрастает, что приводит к сдавливанию сухожилий и возникновению болей.
  • Периоститов. Периоститом называется воспаление надкостницы – наружной оболочки кости, отвечающей за защиту и обновление костной ткани.
  • Фиброзитов. Фиброзитом называется воспаление фасциальных оболочек, окружающих мышцы. Вначале это может проявляться легкой болезненностью в области мышц, а затем в месте болезненности формируются плотные узелки, которые легко смещаются под кожей.

Для бруцеллеза характерно поражение как дыхательных путей, так и самой легочной ткани.

При бруцеллезе может развиться:

  • Катаральная ангина.Ангиной называется воспаление небных миндалин (гланд). Гланды состоят из скопления клеток иммунной системы (лимфоцитов), которые одними из первых контактируют с инфекционными агентами, проникающими через верхние дыхательные пути. А так как при бруцеллезе повышается активность всей иммунной системы, гланды реагируют на внедрение бруцелл особенно интенсивно. Ангина при бруцеллезе характеризуется развитием негнойного воспалительного процесса, что проявляется першением и болями в горле, усиливающимися во время речи и при глотании. При осмотре слизистая оболочка гланд и задней стенки глотки ярко-красного цвета, отечна.
  • Фарингит (воспаление слизистой оболочки глотки).Фарингит обычно сопровождает катаральную ангину и имеет схожие клинические проявления. Температура тела при ангине и фарингите может быть слегка повышенной (до 38 – 39 градусов).
  • Бронхит.Бронхитом называется воспаление слизистой оболочки бронхов, приводящее к ее отеку и усиленной секреции бронхиальной слизи. Клинически бронхит проявляется кашлем и болями в грудной клетке. Кашель вначале сухой, мучительный, однако через несколько дней становится продуктивным, то есть сопровождается выделением мокроты слизистого характера. При выслушивании легких у таких больных определяются сухие (в первые несколько дней заболевания) или влажные (в более поздние сроки) хрипы. При тяжелом течении бронхита кашель может стать причиной появления одышки (чувства нехватки воздуха).
  • Пневмония.Пневмонией называется воспаление легочной ткани, сопровождающееся нарушением процесса газообмена в пораженном участке легкого. Стоит отметить, что при бруцеллезе пневмония встречается не более чем у 1 – 2 % больных. Основными жалобами пациентов при этом являются постепенно прогрессирующая одышка и продуктивный кашель, во время которого может выделяться слизистая или слизисто-гнойная (серого или желтоватого цвета) мокрота. При выслушивании легких у таких больных определяется ослабление дыхания над пораженным участком (из-за того что воздух не проходит в пораженную альвеолярную ткань). Общее состояние также может быть нарушено (может отмечаться повышение температуры тела до 39 и более градусов, общая слабость, разбитость и так далее).

Поражение сердечно-сосудистой системы при бруцеллезе может проявляться:

  • Миокардитом. Миокард – это непосредственно сердечная мышца, ответственная за выполнение органом своей насосной функции. При ее воспалении (миокардите) может отмечаться одышка, усиленное и учащенное сердцебиение (особенно на фоне лихорадки), нарушение частоты и ритма сердечных сокращений (аритмия). Также больные могут жаловаться на колющие боли в области сердца, не зависящие от интенсивности выполняемой работы или от положения тела.
  • Эндокардитом. Эндокард – это внутренняя оболочка сердца, которая выстилает его камеры и непосредственно контактирует с кровью. Эндокард очень гладкий, ввиду чего клетки крови не прилипают к нему. Развитие эндокардита при бруцеллезе характеризуется нарушением целостности эндокарда и повышенным риском образования тромбов (кровяных сгустков), которые могут отрываться и с током крови переноситься в различные органы, закупоривая кровеносные сосуды и нарушая кровообращение в них. Наиболее опасным при эндокардите является поражение клапанов сердца (их патологическое сужение в результате поражения воспалительным процессом), что со временем может стать причиной развития сердечной недостаточности.
  • Перикардитом. Перикард – это наружная оболочка сердца (сердечная сумка), состоящая из двух листков — внутреннего (непосредственно окружающего сердечную мышцу) и наружного, который крепится к окружающим тканями и органам. Главной функцией перикарда является обеспечение подвижности сердца во время сокращений и расслаблений, при которых внутренний и наружный листки смещаются друг относительно друга. Если при бруцеллезе развивается перикардит, это приводит к образованию большого количества экссудата (воспалительной жидкости). Эта жидкость скапливается между листками перикарда и сдавливает сердечную мышцу, нарушая процесс сердечных сокращений и расслаблений.
  • Тромбофлебитом. Процесс проникновения бруцелл в кровь сопровождается активацией иммунной системы, что может привести к нарушению целостности внутренней оболочки кровеносных сосудов (эндотелия) и к воспалению венозных стенок. В результате этого к поврежденным участкам эндотелия прикрепляются тромбоциты (клетки крови, ответственные за остановку кровотечений) и формируется тромб, который нарушает ток крови по сосуду. Проявляется это выраженными болями в месте образования тромба, а также отеком тканей, отток крови из которых нарушен (например, при тромбофлебите вен бедра будет отмечаться отек в области стопы и голени). Наиболее опасным в данном случае является повышенный риск отрыва тромба и переноса его с током крови в легкие, где он может закупорить легочные сосуды и привести к смерти пациента.

Функциональные поражения нервной системы могут выявляться при подостром бруцеллезе, в то время как при хронической форме заболевания обычно возникают более серьезные нарушения.

Поражение нервной системы при бруцеллезе может проявляться:

  • Менингитом. Воспаление оболочек головного мозга при бруцеллезе встречается относительно редко, обычно развиваясь через 3 – 4 недели после инфицирования. Клинически менингит проявляется ригидностью затылочных мышц (голова больного не сгибается вперед из-за выраженного напряжения мышц задней части шеи) и другими менингеальными признаками. Также может отмечаться выраженное повышение температуры, озноб, тошнота или рвота, нарушение сознания.
  • Энцефалитом.Энцефалит развивается при поражении воспалительным процессом ткани головного мозга. Помимо общей симптоматики (повышения температуры, головных болей и так далее) могут наблюдаться симптомы очагового поражения мозга (нарушения чувствительности или двигательной активности в конечностях, а также нарушение или исчезновение различных других функций, за которые отвечал пораженный участок головного мозга).
  • Миелитом. Данным термином обозначается поражение спинного мозга, возникающее при заносе в него бруцелл с током крови. Клинически это проявляется нарушением чувствительности в области верхних или нижних конечностей. Больные жалуются на онемение, парестезии (чувство ползания мурашек), покалывание или жжение в различных участках тела. Через некоторое время после этого присоединяются и двигательные нарушения (вплоть до полного паралича).
  • Плекситом. Данным термином обозначается воспалительное поражение нервных пучков и сплетений, иннервирующих те или иные участки тела. При бруцеллезе может развиваться плексит шейного сплетения (иннервирует мышцы и кожу шеи), плечевого сплетения (иннервирует верхнюю конечность), пояснично-крестцового сплетения (иннервирует нижнюю конечность). Клинически плексит также проявляется нарушением чувствительности или двигательной активности в пораженной области.
  • Межреберными невралгиями. Характеризуется периодически возникающими болями тупого, ноющего или жгучего характера в одном или сразу в нескольких межреберных промежутках. Причиной болей является повреждение межреберных нервов воспалительным процессом. Боль обычно усиливается во время вдоха, что может стать причиной выраженного нарушения дыхания.

Поражение органов половой системы может произойти даже при подостром бруцеллезе. Без своевременного лечения патологический процесс будет прогрессировать, что со временем приведет к развитию необратимых изменений в пораженных органах и может стать причиной бесплодия.

При бруцеллезе у мужчин может развиться:

  • Орхит. Воспаление яичка, проявляющееся выраженными колющими или ноющими болями, которые могут иррадиировать (отдавать) в паховую область, промежность, в нижнюю часть живота или в поясницу. При осмотре пораженное яичко увеличено в размерах, резко болезненно при пальпации (прощупывании). При выраженном отеке могут сглаживаться естественные складки в области мошонки, она становится гладкой, гиперемированной (красного цвета), более теплой (по сравнению с невоспаленными участками).
  • Эпидидимит (воспаление придатка яичка). Клинически проявляется болями в области мошонки, а также болезненностью во время мочеиспускания или эякуляции (семяизвержения). При пальпации (прощупывании) в мошонке определяется объемное болезненное образование. Само яичко при этом может быть нормальным или также воспаленным (в данном случае речь идет об орхоэпидидимите).
  • Простатит. Воспаление предстательной железы, проявляющееся болями в паховой и/или поясничной области, а также в нижних отделах живота. Характерной особенностью простатита является выраженное жжение или режущая боль в паху во время мочеиспускания.
Читайте также:  Актриса умершая от бруцеллеза

Бруцеллез у женщин может проявляться:

  • Эндометритом. Воспаление эндометрия (слизистой оболочки матки, выстилающей ее внутреннюю поверхность) может проявляться болями в нижних отделах живота, а также патологическими кровотечениями (возникающими вне менструального цикла). Без своевременного лечения воспалительный процесс может перейти на мышечный слой матки или на маточные трубы, что приведет к развитию осложнений.
  • Сальпингитом.Сальпингит – это воспаление маточных труб, соединяющих матку с яичниками. При прогрессировании воспалительного процесса может поражаться не только слизистая оболочка, ни и вся толщина стенки маточной трубы, что без лечения может стать причиной ее непроходимости и связанного с этим бесплодия.
  • Оофоритом. Воспаление яичников, которое часто сочетается с воспалением маточных труб. Проявляется острыми или ноющими болями в нижней части живота, а также болями во время полового акта. У большинства женщин при этом отмечаются нарушения менструального цикла (нерегулярные менструации, боли при выделении менструальной крови и так далее). Без своевременного лечения оофорит также может стать причиной бесплодия и снижения полового влечения у женщин.

Поражение глаз при бруцеллезе может проявляться:

  • Увеитом.Увеит (воспаление сосудистой оболочки глаза) может включать в себя иридоциклит (воспаление радужки и ресничного тела), хориоидит (воспаление задней стенки сосудистой оболочки, при котором может поражаться сетчатка) или панувеит (воспаляются все структуры сосудистой оболочки глаза). Проявляется увеит покраснением глаза, выраженностью сосудистого рисунка и нарушением зрения. Возникающее при этом нарушение кровообращения может стать причиной развития более грозных изменений, вплоть до потери зрения.
  • Кератитом. Воспаление роговицы глаза, проявляющееся ее помутнением или изъязвлением. Больные обычно жалуются на нарушение зрения, слезоточивость и светобоязнь, покраснение глаза.

В зависимости от стадии заболевания, а также от выраженности клинических проявлений выделяют несколько форм бруцеллеза, каждая из которых имеет особый прогноз и требует особого лечения.

В зависимости от выраженности клинических проявлений различают:

  • острый бруцеллез;
  • подострый бруцеллез;
  • хронический бруцеллез;
  • резидуальный бруцеллез.

Острый период заболевания начинается вместе с первыми клиническими проявлениями (обычно через месяц после инфицирования патогенными видами бруцелл) и длится не более полутора месяцев. Однако стоит отметить, что в некоторых случаях (например, у людей с ослабленным иммунитетом либо при малой первоначальной дозе возбудителя) первые симптомы заболевания могут появиться через 2 или 3 месяца после заражения.

Развиваться острый бруцеллез может быстро (полная клиническая картина заболевания определяется уже через несколько дней после появления первых его симптомов) либо медленно, что обычно наблюдается у пожилых людей (их иммунная система не может быстро реагировать на проникновение бруцелл в кровоток, в связи с чем новые симптомы могут появляться и прогрессировать в течение нескольких недель).

Первыми и основными жалобами больных при острой форме заболевания являются выраженная слабость, снижение трудоспособности, лихорадка и другие симптомы интоксикации. У большинства пациентов при этом выявляется генерализованное увеличение лимфоузлов.

Важно отметить тот факт, что даже при выраженной интоксикации и повышении температуры тела общее самочувствие больных остается относительно стабильным, что является частой причиной ошибок во время постановки диагноза. Поражения различных органов для острого бруцеллеза не характерны, однако в особо тяжелых случаях уже в течение первых недель у больных могут появляться боли в суставах и в мышцах, поражения половой, нервной и других систем.

О подостром бруцеллезе говорят в том случае, если клинические симптомы сохраняются в течение 1,5 – 4 месяцев. Отличительной особенностью подострой формы заболевания является волнообразное течение лихорадки. Температура тела у таких пациентов обычно повышена, причем у большинства больных отмечается колебание температурной кривой даже в течение суток (утром может отмечаться легкий субфебрилитет, а к вечеру температура может переваливать за отметку в 40 градусов). Через несколько дней температурная кривая нормализуется (что сопровождается стиханием других симптомов), однако после непродолжительного промежутка времени лихорадка вновь обостряется.

Возникающие при подостром бруцеллезе поражения органов и систем носят функциональный характер, то есть при своевременно начатом и адекватно проводимом лечении могут быть полностью устранены.

Хронический бруцеллез диагностируются у пациентов, у которых клинические и/или лабораторные признаки заболевания наблюдаются в течение 4 месяцев и дольше. В течение этого времени иммунная система организма успевает перестроиться, вследствие чего начинает по-другому реагировать на развивающиеся в нем бруцеллы. Обострения заболевания наблюдаются реже, а лихорадка при этом не так выражена. Периоды ремиссии между двумя последующими обострениями могут длиться по несколько месяцев, однако полного исчезновения всех симптомов при этом не происходит, так как имеет место поражение различных органов и систем.

Такая клиническая картина может наблюдаться в течение 2 – 3 лет, при этом симптомы поражения различных органов и систем будут прогрессировать после каждого нового обострения заболевания. В то же время, при повторном инфицировании (например, если больной человек продолжает контактировать с зараженными животными) возможно более длительное течение заболевания. Прогноз в данном случае крайне неблагоприятен, так как развивающиеся органные поражения могут приобретать необратимый характер.

Заподозрить диагноз бруцеллеза можно после тщательного опроса больного, а также на основании данных клинического обследования и данных об эпидемиологической обстановке в районе. В то же время, для подтверждения диагноза необходимо провести ряд лабораторных исследований.

Во время опроса больного врач может спросить:

  • Как давно появились первые симптомы заболевания (лихорадка, общее недомогание и так далее)?
  • Кем работает пациент (в частности врача интересует, не занят ли больной в сфере животноводства)?
  • Имел ли место контакт с домашними или дикими животными, которые могли бы быть переносчиками бруцеллеза (с крупным или мелким рогатым скотом, со свиньями, с собаками, зайцами, оленями и так далее)? Если да – как давно?
  • Употреблял ли пациент в пищу термически необработанные (или плохо обработанные) продукты животного происхождения (мясо, молоко и так далее)?
  • Болел ли пациент бруцеллезом ранее? Если да – как давно?
  • Имеются ли схожие симптомы у кого-либо из окружения пациента (у коллег по работе, жены/мужа, детей)?

Для уточнения диагноза врач может назначить:

  • анализ крови;
  • серологическую диагностику;
  • микробиологическое исследование.

В общем анализе крови (ОАК) обычно не выявляется никаких специфических изменений. Тем не менее, неспецифические признаки воспаления в организме помогают определить стадию заболевания и оценить активность инфекционно-воспалительного процесса.

При обострении бруцеллеза в ОАК может быть выявлено:

  • Увеличение общего числа лейкоцитов (норма – до 9,0 х 10 9 /л). Лейкоциты – это клетки иммунной системы организма, которые реагируют на внедрение чужеродных агентов. Однако стоит отметить, что иногда при бруцеллезе количество лейкоцитов остается нормальным (это характерно для пожилых людей с ослабленным иммунитетом).
  • Увеличение количества моноцитов (норма – 3 – 9%). Моноциты представляют собой разновидность лейкоцитов, которые переходят из крови в ткани различных органов, превращаясь в макрофаги. Именно макрофаги ответственны за поглощение и переваривание попавших в организм бруцелл, поэтому у больных с бруцеллезом может отмечаться умеренный моноцитов (увеличение количества моноцитов в крови) через несколько недель после инфицирования.
  • Уменьшение количества нейтрофилов. Является неспецифическим, но часто встречающимся лабораторным признаком бруцеллеза.
  • Увеличение скорости оседания эритроцитов (норма – до 10 мм в час у мужчин и до 15 мм в час у женщин). Этот лабораторный показатель может использоваться для оценки степени активности воспалительного процесса в организме. При активации иммунной системы в кровь выделяются так называемые белки острой фазы воспаления, которые крепятся на поверхности эритроцитов (красных клеток крови), способствуя их склеиванию друг с другом, в результате чего они быстрее оседают на дно пробирки во время проведения исследования.

При проникновении в организм чужеродных микроорганизмов (бактерий, патогенных грибков и любых других) иммунная система реагирует определенным образом, вырабатывая специфические антитела. Данные антитела попадают в кровоток и связываются только с тем чужеродным микроорганизмом, против которого они были синтезированы (то есть антитела против бруцелл не будут взаимодействовать ни с какими другими бактериями). Исходя из этого, следует, что чем больше бруцелл в организме, тем выше будет количество синтезируемых против них антител в сыворотке крови. На данном принципе основано множество диагностических методов, называемых серологическими.

При серологической диагностике бруцеллеза может быть использована:

  • Реакция Райта (реакция агглютинации). Реакция Райта становится положительной уже с первых недель заболевания и может применяться с диагностической целью на протяжении всего острого периода болезни. Суть данной реакции заключается в том, что при взаимодействии антигенов бруцелл (особых комплексов, располагающихся на поверхности бактерий) со специфическими антителами они выпадают в осадок. Для проведения реакции в пробирку помещается специально подготовленная взвесь антигенов, после чего добавляется определенное количество сыворотки пациента, которую нужно исследовать. Если в исследуемой сыворотке имеются антитела против бруцелл (то есть если организм больного контактировал с данными бактериями и его иммунная система начала против них бороться), они будут взаимодействовать с антигенами и выпадать в осадок, что будет видно при оценке результатов. Если же антител в крови пациента нет, никакой реакции не произойдет.
  • Реакция Кумбса. При хроническом бруцеллезе возможно образование так называемых неполных антител, которые не выявляются при реакции агглютинации. Однако данные антитела (являющиеся иммуноглобулинами) фиксируются на многих клетках человеческого организма, в том числе на эритроцитах. Суть реакции Кумбса заключается в добавлении к исследуемой крови специфических реагентов, которые взаимодействуют с неполными антигенами. Если таковые имеются на поверхностях эритроцитов, произойдет склеивание красных клеток крови, то есть реакция окажется положительной.
  • Проба Бюрне. Суть данной пробы заключается в следующем. Пациенту внутрикожно вводят очень маленькую дозу бруцеллезных антигенов и наблюдают за последующей реакцией. Если пациент никогда не болел и не болеет бруцеллезом, его иммунная система не подготовлена к борьбе с данными антигенами (на выработку специфических антител необходимо минимум несколько недель). Никаких выраженных реакций при этом не будет (возможно непродолжительное и безболезненное покраснение кожи в области введения, что является естественной реакцией организма на чужеродное вещество). Если же пациент заражен бруцеллезом, его иммунная система активно вырабатывает антитела против антигенов данного возбудителя. Внутрикожное введение таких антигенов вызовет ярко выраженную местную аллергическую реакцию, которая будет проявляться покраснением, отечностью и болезненностью кожи в месте введения в течение 24 – 48 часов. Данная проба будет положительной уже через 20 – 30 дней после заражения (когда явные клинические признаки болезни могут отсутствовать).

Суть данного исследования заключается в выделении возбудителей из различных биологических тканей организма (из крови, из пунктатов лимфатических узлов, из спинномозговой жидкости и так далее). Для выявления бруцелл производят посев исследуемого материала на специальные питательные среды и выращивают их при специальных условиях в течение длительного времени.

Стоит отметить, что ввиду сложности проведения и частых ложноотрицательных результатов, а также из-за высокой заразности исследуемого материала данное исследование проводится крайне редко (оно может выполняться только в специально оборудованных лабораториях и специально обученным персоналом).

Дифференциальную диагностику проводят для того, чтобы отличить бруцеллез от заболеваний, имеющих схожую клиническую картину. Так, например, при остром бруцеллезе следует исключить заболевания, протекающие с выраженной лихорадкой. В пользу бруцеллеза при этом будет свидетельствовать волнообразное повышение температуры, генерализованное увеличение лимфатических узлов и относительно удовлетворительное общее состояние пациента.

Острый бруцеллез следует дифференцировать:

  • От малярии. При данной патологии лихорадка также характеризуется волнообразным течением, однако имеются данные о пребывании пациента в очагах распространения данного заболевания (обычно это тропические страны), а также об укусах комаров, являющихся переносчиками малярии.
  • От СПИДа (синдрома приобретенного иммунодефицита). При данной патологии также может наблюдаться генерализованное увеличение различных групп лимфоузлов, однако отсутствует лихорадка.
  • От сепсиса. При данной патологии в кровь попадают гноеродные микроорганизмы, которые разносятся по всему организму и поражают многие органы и ткани. Температура тела при этом может повышаться до 40 – 42 градусов и сохраняться на таком уровне в течение всего периода заболевания, что обычно сочетается с крайне тяжелым общим состоянием пациента (вплоть до развития комы).
  • От лимфогранулематоза. Это опухолевое заболевание системы крови, при котором также поражаются лимфатические узлы и возможно волнообразное повышение температуры. В отличие от бруцеллеза, при лимфогранулематозе вначале увеличивается одна группа лимфатических узлов, а со временем (в течение нескольких недель или месяцев) патологический процесс распространяется на другие группы. Помочь в постановке диагноза в данном случае поможет подробный опрос больного (в частности уточняется, не контактировал ли он с животными-переносчиками бруцеллеза) и лабораторная диагностика.

Подострый и хронический бруцеллез следует дифференцировать от артритов (воспаления суставов) при ревматических заболеваниях. Для ревматических артритов характерно преимущественное поражение мелких суставов, а также наличие выраженной скованности в суставах по утрам, которая проходит через 30 – 60 минут после пробуждения (при бруцеллезе утренняя скованность практически не наблюдается).

источник

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллерги­ческих проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем. Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно опорно-двигательный аппарат Методы микробиологической диагностики бруцеллеза представлены в схеме 7.

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин

Серологический метод— постановка РА с сывороткой крови больного (реакция Райта, ставят в начале 2-й недели болезни, диагностический титр 1:200 и выше), ускоренной РА на стекле (реакция Хеддльсона), РСК и ИФА.

Диагностикумом в реакции Райта и Хеддльсона является взвесь убитых бруцелл с красителем генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Реакцию агглютинации Хеддльсона ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят микропипеткой неразведенную исследуемую сыворотку в количествах 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме по­следней дозы, в которую вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки). Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината. Отсутствие агглюти­нации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) — сомнительная, во 2-й (0,04 мл) — слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) — положительная, во всех пробах — рез­ко положительная реакция. Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM,которыев отличие от IgG по­являются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод –постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания. Учет реакции проводится через 24-48 часов, положи­тельной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более. Положительная аллергическая ре­акция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перене­сенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод— посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюко­зы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных резуль­татах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблю­дается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО2-инкубаторе) при температуре 37 0 С до 1 ме­сяца, делая пересевы на скошенный пече­ночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестя­щих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний. Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Читайте также:  Абортированный плод при бруцеллезе

Выполняются также посевы ис­следуемого материала в желток свежего куриного яйца или в жел­точный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 37 0 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 — грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспеци­фическими сыворотками против антигеновА, М, R), чувствительности к специфическому бактери­офагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак Вид бруцелл
Br. melitensis Br. abortus Br. suis
Условия культивирования аэробные 10% СО2 аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000 + +
тионином 1:25000 + +
пиронином 1:200000 + +
Образование Н2S ± ±
РА с монорецепторными сыворотками
А ± ± +
М ± ± ±
Чувствительность к бруцеллезному фагу + ±

. Обозначения: «-« — отрицательная; «+» — положительная; «±» — непостоянная реакции.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Методы МБ диагностики бруцеллеза.

· К биологической пробе ( заражение морских свинок) прибегают в том случае, если материал сильно загрязнён посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. (Вводится морской свинке по 1.0 подкожно в паховую обл. Через 30 дней: Проба Бюрне, р-ия Райта, посев материала из органов и лимфатических узлов на питатетльные среды для выделения чистой культуры)

· Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах — МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

Б. Для обнаружения антигена

1. Реакция агрегат-гемагглютинации.

2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

· Аллергический — проба Бюрне

От больного человека — кровь, костный мозг , моча (печеночный бульон + антифаговая сыворотка)

От больного животного — абортивный плод, околоплодная жидкость, кусочки некротизированной плаценты, моча, молоко, мясо (печеночный агар и бульон+ антифаговая сыворотка+ генциа-виолет)

Печеночный МПА + антифаговая сыворотка:

1)Биохимические тесты( активность уреазы, образование сероводорода. При необходимости др тесты.

2)Р-ия агглютинации со спец. сывороткой

3) Изучение отношения к Тбилиотическому бруцеллезному фагу

4)Изучение роста на средах с красителями

Серодиагностика бруцеллеза.

Преимущества реакции Кумбса при серодиагностике бруцеллеза.

При помощи р-ии прямой и пассивной агглютинации определяют полные ( бивалентные) антитела. Неполные ( моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами , так как, соединяясь с антигеном , блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигены в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют спец. р-июКумбса. В р-ии участвуют : а)сыворотка больного в которой преобладают неполные антитела, б)антиген-диагностикум, в)антиглобулиновая сыворотка- антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в 2 этапа:

1)взаимодействие антигена с неполными антителами

2)взаимодействие антиглобулиновой сыворотки с антителами, адсорбированными на антигене.

В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают 2 одновалентных антитела, адсорбированных соотвественно на 2 антигенах , что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

Серологические экспресс-реакции для диагностики бруцеллеза.

Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

Реакция Хеддльсона и реакция Райта, их сущность.

1. Реакция Хеддльсона: На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3×3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипет­кой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положи­тельная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

2. Реакция Райта(ставится по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта — 1:200): Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза. Отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки — реакция «отрицательная». Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости. Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза

Дата добавления: 2019-01-14 ; просмотров: 282 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

Бруцеллез – это зоонозная, то есть передающаяся от животных людям инфекция. Для этого заболевания характерно множественное поражение органов и систем – затрагиваться может мочеполовая, сосудистая, пищеварительная, половая система. Вызывают заболевание бактерии рода Brucella. В основном эта инфекция поражает животных и птиц. Но если люди контактируют с зараженными бруцеллезом животными или с продуктами животного происхождения, содержащими инфекцию, они тоже впоследствии заболевают.

Как свидетельствует Википедия, впервые признаки этой болезни описал Гиппократ больше двух тысяч лет тому назад. А вот первое научное описание бруцеллеза в 1861 году сделал военный врач из Англии Мэрстон. После этого заболевание упоминали в письменных работах в разных странах, и оно получало разные названия – например, средиземноморская и мальтийская лихорадка. Называли его также «волнообразная лихорадка». Определение «волнообразная лихорадка» появилось из-за особого симптома бруцеллеза – рецидивирующей лихорадки.

В 1886 году микробы, вызывающие это заболевание, обнаружил ученый из Англии Дэвид Брюс. Именно в честь ученого эти бактерии и получили название бруцеллы. В истории этого заболевания есть еще один приметный факт: в середине двадцатого века в Соединенных Штатах бактерию использовали как бактериологическое оружие. Но в 1969 году это было запрещено.

Бруцеллы – мелкие бактерии, не образующие спор, неподвижные, грамотрицательные. Возбудитель бруцеллеза может паразитировать внутриклеточно. В работах, где описывается микробиология бруцеллеза, утверждается, что источники опасных для человека бруцелл – это: козы, овцы (возбудитель Br.melitensis), свиньи (Br.abortus suis), коровы (Br.abortus bovis), собаки (Br.canis). Возбудитель выделяется с молоком, околоплодными водами, мочой. Бактерии достаточно жизнеспособные, они могут сохраняться в почве до 100 дней. Гибнут в сухой среде при температуре 90-95 градусов за один час, во влажной — при температуре 55 градусов Цельсия за то же время. При кипячении бруцеллы погибают сразу.

Переносчики бруцеллеза – животные, с которыми контактирует человек. Бруцеллез животных – это хроническое инфекционное заболевание, проявляющееся чаще всего у крупного рогатого скота, свиней, овец. Часто диагностируется бруцеллез у коров на фермах, вызывая у них аборты. У КРС наблюдается потеря аппетита, снижение активности, повышается температура. Бруцеллез у собак провоцирует проблемы с репродукцией. Соответственно, и симптомы бруцеллеза у собак проявляются нарушениями в половой сфере.

Человек может заразиться и при потреблении продуктов с бруцеллами. Воротами для инфекции являются микротравмы кожи, слизистой органов пищеварения и респираторного тракта. После того, как происходит инфицирование, большинство бруцелл быстро элиминируются вследствие фагоцитоза. Но часть из них сохраняются жизнеспособными в фагосомах. Возбудители лимфогенным путем попадают в лимфатические узлы, где накапливаются. Когда бруцеллы выходят в кровь, у пациента развиваются клинические признаки заболевания. Вследствие инфицирования происходит выраженная аллергическая перестройка организма. В течение длительного времени после очищения организма от возбудителя отмечается резко выраженная гиперчувствительность замедленного типа.

Заболевание протекает хронически. После того, как человек переболел, к нему вырабатывается иммунитет, однако непродолжительный. Через несколько лет может произойти повторное заражение.

Выделяются такие разновидности бруцеллеза согласно продолжительности протекания:

  • Острый – длится не больше 3 месяцев.
  • Подострый – продолжается от 3 до 6 месяцев.
  • Хронический – длится дольше 6 месяцев.

С учетом симптоматики и особенностей протекания заболевания выделяют такие клинические формы бруцеллеза:

  • Первично-латентная – человек чувствует себя практически здоровым. Если же иммунитет у него ослаблен, эта форма может перейти в другую (остросептическую или в первично-хроническую метастатическую). Иногда при таком течении болезни немного увеличиваются лимфоузлы, температура повышается до субфебрильных показателей, при физическом напряжении отмечается потливость. При этом работоспособность сохраняется.
  • Остросептическая – отмечается лихорадка(температура поднимается до 40 градусов), озноби потливость. Эти симптомы проявляются волнообразно. При этом самочувствие остается нормальным даже при высокой температуре, признаки интоксикации отсутствуют. Лимфоузлы увеличены умеренно, иногда чувствительны. Через несколько дней увеличивается селезенка. Состояние не угрожает жизни.
  • Первично-хроническая метастатическая – развивается сразу, без остросептической формы. Отмечается продолжительная субфебрильная температура, бессонница, раздражительность, ухудшение работоспособности и аппетита. Лимфоузлы чувствительные. Увеличивается селезенка и печень. Отмечаются поражения органов, преимущественно опорно-двигательного аппарата. Также могут поражаться нервная и половая системы. Болят суставы и мышцы, развивается полиартрит, отмечаются другие метастазы. Может поражаться позвоночник в поясничном отделе. Возможны невриты, радикулитыи др. Вероятно снижение половой функции, аменорея. Также проявляются другие характерные симптомы.
  • Вторично-хроническая метастатическая — развивается после остросептической формы, для нее характерны симптомы и проявления, аналогичные первично-хронической метастатической форме.
  • Вторично-латентная – от первично-латентной отличается тем, что чаще рецидивирует.

Причина развития бруцеллеза – заражение микроорганизмами рода бруцелл. Существуют такие способы заражения:

  • Контактный – человек инфицируется, когда контактирует с больным животным, ухаживает за ним. Бактерии могут попасть на кожу или слизистые с повреждениями.
  • Алиментарный — при потреблении зараженных продуктов. Заразиться можно, если есть животные продукты, зараженные бруцеллой. Чаще всего инфицирование происходит при потреблении сырого молока, сыра или творога из непастеризованного молока, реже – при потреблении недостаточно обработанного термически мяса животных.
  • Аэрогенный – этот путь заражения встречается очень редко. Инфицирование происходит, когда человек вдыхает пыль с возбудителем бруцеллеза.

Длительность инкубационного периода при бруцеллезе – от 5 дней до нескольких месяцев. Но чаще всего он продолжается около двух недель.

Симптомы заболевания могут развиваться внезапно. Человека начинает беспокоить головная боль, лихорадка, боль в суставах и пояснице. Отмечается общее недомогание, иногда присоединяется диарея.

Но иногда признаки нарастают постепенно. В таком случае сначала больной чувствует небольшое продромальное недомогание, боль в мышцах и в шее сзади, у него может также болеть голова. Через некоторое время в вечерний период у него повышается температура тела.

Когда заболевание прогрессирует, температура повышается до показателей 40-41 °C, а потом постепенно возвращается к норме. При этом по утрам человек обильно потеет.

В большинстве случаев неустойчивая лихорадка наблюдается у больного от 1 до 5 недель, при этом отмечается ремиссия сроком от 2 дней до 2 недель, на протяжении которых выраженность симптомов значительно уменьшается. Иногда лихорадка бывает транзиторной, или же она проявляется волнами, когда периодически она возникает как лихорадка неизвестного происхождения.

После начальной стадии с лихорадкой при бруцеллезе могут проявляться такие симптомы:

  • потеря веса, анорексия;
  • боли в животе, суставах, головные боли;
  • бессонница, слабость;
  • раздражительность, депрессия;
  • склонность к запорам;
  • увеличение лимфоузлов;
  • гепатомегалия(примерно у половины пациентов).

Однако системные поражения могут затрагивать все органы. Они очень разнообразны. В частности, проявляются нарушения в деятельности опорно-двигательного аппарата, дыхательной, пищеварительной, мочеполовой систем, сердца, ЦНС, зрения.

В процессе диагностики врач проводит опрос, определяя, контактировал ли больной с животными, потреблял ли термически необработанную пищу животного происхождения. Важны и другие сведения, в частности место работы больного, наличие эндемических очагов.

Принимается во внимание клиническая картина.

Для подтверждения диагноза применяют бактериологические, серологические и кожно-аллергический методы.

Обязательно проводится общий анализ крови. Также практикуется анализ на бруцеллез путем посева крови на питательную среду. Проводятся специальные анализы — реакция Райта, реакция Кумбса, реакция Хеддлсона, кожная проба Бюрне, 2-меркаптоэтанол-аглютинитовый тест.

Основным методом лечения является применение специально подобранной врачом схемы приема антибиотиков. Также лечение бруцеллеза предусматривает использование дополнительных методов.

источник

  • Главная
  • «ПРОФИЛАКТИКА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА ЛЮДЕЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.1.7.1189-03» (утв. Главным государственным санитарный врачом РФ 30.01.2003)
Наименование документ «ПРОФИЛАКТИКА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА ЛЮДЕЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.1.7.1189-03» (утв. Главным государственным санитарный врачом РФ 30.01.2003)
Вид документа методические указания
Принявший орган главный государственный санитарный врач рф, минздрав рф
Номер документа МУ 3.1.7.1189-03
Дата принятия 01.01.1970
Дата редакции 01.01.1970
Дата регистрации в Минюсте 01.01.1970
Статус действует
Публикация
  • М., Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава РФ, 2003
Навигатор Примечания

5.2. Методы выявления специфических антител

При бруцеллезе рекомендуется несколько методов, которые используются в зависимости от целей исследования.

При проведении эпидобследования населения в очагах рекомендуется: реакция агглютинации — пластинчатая (Хеддлсона), РПГА, ИФА, кожно-аллергическая проба Бюрне.

При обследовании населения перед профилактической вакцинацией: пластинчатая реакция агглютинации (Хеддлсона) или ИФА и кожно-аллергическая проба Бюрне или реакция лизиса эритроцитов.

Для диагностики острого и подострого бруцеллеза проводят бактериологические исследования, ставят реакцию агглютинации и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса. Может быть использована ИФА.

Для диагностики хронического бруцеллеза и при проведении диспансерного наблюдения за переболевшими бруцеллезом рекомендуется реакция Кумбса, ИФА и аллергические тесты.

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменять друг друга. Это обуславливает необходимость применения комплексного серо-аллергического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (в первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического; серологические реакции в этот период оказываются положительными почти в 98% случаев. По мере удлинения срока заболевания процент положительных серологических реакций (реакция агглютинации, РПГА) начинает падать. В поздние периоды заболевания большую диагностическую ценность имеет реакция Кумбса, ИФА и внутрикожная аллергическая проба.

При проведении обследования нужно учитывать, что если высокие титры антител почти всегда указывают на наличие инфекции, то антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключают возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется проводить повторные исследования с интервалом 1 — 2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.

Следует иметь в виду, что положительную реакцию агглютинации с бруцеллезным антигеном могут давать также сыворотки, содержащие антитела к микроорганизмам, имеющим общие антигенные детерминанты с бруцеллами (Е.coli, V.cholerae, Fr.tularensis, Y.enterocolitica 0 — 9, S.typhimurium).

Преимущество этого метода заключается в простоте постановки реакции, быстром получении результатов и чувствительности реакции. В качестве антигена для постановки реакции Хеддлсона и Райта применяют единый бруцеллезный диагностикум. Реакцию ставят на обычном оконном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле, расчерченном на квадраты величиной 4 x 4 см каждый, по горизонтали должно быть 5 квадратов. На первом квадрате с левой стороны записывается номер испытуемой сыворотки, в последующие квадраты слева направо разливают (микропипеткой или 1 мл градуированной пипеткой) испытуемую сыворотку в следующих дозах: 0,04, 0,02, 0,01 и 0,03 (контроль сыворотки). К первым трем дозам сыворотки добавляют по 0,03 мл антигена. К последней дозе сыворотки (0,03) добавляют 0,03 мл физиологического раствора. Сыворотку осторожно смешивают с антигеном палочкой, начиная с минимальной дозы сыворотки. Контроль антигена ставят, добавляя 0,03 мл физиологического раствора к 0,03 мл антигена. Затем стекло слегка подогревают над пламенем спиртовки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла.

В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья (агглютинат). Максимальный срок наблюдения 8 минут:

Читайте также:  Аборты при бруцеллезе крс

а) контроль сыворотки ставят с каждой испытуемой сывороткой для исключения спонтанной агглютинации;

б) контроль антигена ставят один (при любом числе испытуемых сывороток) для исключения спонтанной агглютинации применяемого антигена.

Учет реакции проводят невооруженным глазом по следующей схеме:

а) полное просветление жидкости с крупными и мелкими хлопьями, т.е. 100% агглютинации (4+);

б) почти полное просветление жидкости с ясно заметными хлопьями, т.е. 75% агглютинации (3+);

в) незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями, т.е. 50% агглютинации (2+);

г) мутная жидкость с едва заметной зернистостью (+);

д) равномерная мутная жидкость (-).

Для оценки результатов рекомендуется следующая схема:

а) агглютинация на 4+ во всех дозах сыворотки — результат «резко положительный»;

б) агглютинация не менее 2+ во всех дозах сыворотки — результат «положительный»;

в) агглютинация только в первой или в первой и второй дозах сыворотки — результат «сомнительный»;

г) отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки — реакция «отрицательная».

Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный результат реакции. При сомнительном или отрицательном результатах реакции и наличии эпидемических и эпизоотических показаний, а также в стационаре и при обследовании доноров, где необходимо определение титра агглютининов и их динамики, следует применять реакции Райта и Кумбса, РПГА и ИФА.

Реакция агглютинации является одним из основных методов диагностики бруцеллеза у людей. Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза.

Техника постановки реакции.

В пробирки разливают физиологический раствор: в первую — 2,4 мл, в остальные по 0,5 мл. В первую пробирку добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, переносят 0,5 мл в третью пробирку и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл смеси выливают, в результате получают в каждой пробирке по 0,5 мл следующих разведений 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. Из первой пробирки 0,5 мл переносят в чистую пробирку и добавляют туда 0,5 мл физиологического раствора (контроль сыворотки в разведении 1:50), а 1,0 мл выливают.

Диагностикум разводят физиологическим раствором согласно прилагаемому к нему наставлению и добавляют по 0,5 мл во все пробирки, кроме контроля. После добавления диагностикума разведение сыворотки соответственно удваивается, т.е. получается 1:50, 1:100 и т.д. Сыворотки с антигеном смешивают путем встряхивания и помещают в термостат (37 °C ) на 18 — 20 часов. После инкубации пробирки выдерживают 1 — 2 часа при комнатной температуре и проводят учет реакции.

Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости.

Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза.

Дальнейшее разведение антигена физиологическим раствором производят по схеме 1.

РАЗВЕДЕНИЕ АНТИГЕНА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИМ РАСТВОРОМ

Степень агглютинации
++++ +++ ++ +
Антиген, разведенный 1:2 0,25 0,5 0,75 1,0
Физ. раствор 1,0 0,75 0,5 0,25
% просветления 100 75 50 25

Стандарт мутности готовят каждый раз при постановке РА и ставят в термостат одновременно с основной реакцией.

Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, — просветление, оцениваемое на 2+.

При применении стандартизированного диагностикума титры исследуемых сывороток соответствуют количеству международных единиц антител (ме/мл).

Так, титры 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. соответственно равны 50, 100, 200 и т.д. ме/мл.

При диагностической оценке РА рекомендуется следующая схема:

— титр сыворотки 1:100 (100 ме/мл) — результат положительный;

— титр сыворотки 1:200 (200 ме/мл) — результат положительный;

— титр сыворотки 1:400 (400 ме/мл) — результат резко положительный.

Диагностическим титром принято считать реакцию агглютинации не менее 2+ при разведении сыворотки 1:100 и выше.

В диагностике бруцеллеза у людей и животных, особенно при хроническом течении инфекции, когда реакция агглютинации может быть отрицательной или положительной в низких титрах, важное место следует отвести выявлению неполных антител. При постановке реакции Кумбса используют предварительно оттитрованную антиглобулиновую сыворотку против глобулинов человека (например — антиглобулиновая сыворотка для иммуноэлектрофореза против глобулинов человека) (см. схему титрации).

Техника постановки реакции Кумбса (РК).

В начале ставят реакцию агглютинации (Райта). После учета реакции агглютинации (через 20 часов) берут не менее трех пробирок первых разведений при отрицательном результате реакции агглютинации или не менее трех пробирок, начиная со слабоположительного результата (+, ++). Эти пробирки центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 20 минут для осаждения антигена. Надосадочную жидкость осторожно отсасывают с помощью пастеровской пипетки и отбрасывают, затем в каждую пробирку наливают по 1 мл физиологического раствора, тщательно встряхивают и снова центрифугируют, таким образом осадок промывают три раза. После последнего центрифугирования к осадку отмытого антигена добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки в рабочем титре, пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат на 18 — 20 часов. Учет реакции проводят так же, как при реакции агглютинации. Диагностическим титром РК считается агглютинация не менее 2+ в разведении сыворотки 1:50.

Для контроля антиглобулиновой сыворотки взять в опыт сыворотку, содержащую неполные антитела с известным титром.

Контроль антигена. Взвесь антигена в физиологическом растворе подвергается отмыванию центрифугированием, как в основной реакции, после чего добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки. При учете в контроле антигена наблюдается равномерное помутнение.

Схема титрования антиглобулиновой сыворотки для РК.

Для титрования антиглобулиновой сыворотки (против глобулинов человека) необходимо иметь сыворотку крови человека, заведомо содержащую неполные антитела к бруцеллам в высоком титре. Титрование антиглобулиновой сыворотки производят следующим образом. Вначале титруют положительную бруцеллезную сыворотку в реакции агглютинации (Райта). При этом делают несколько рядов разведений сыворотки, приблизительно — 8 рядов (схема 2).

РЕЗУЛЬТАТЫ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

N рядов Разведения сыворотки, содержащей неполные антитела
1:50 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400
1 4+ 4+ 2+
2 4+ 4+ 2+
3 4+ 4+ 2+
4 4+ 4+ 2+
5 4+ 4+ 2+
6 4+ 4+ 2+
7 4+ 4+ 2+
8 4+ 4+ 2+

После учета реакции агглютинации во всех рядах отбирают пробирки, в которых отсутствует агглютинация (в схеме 1 — начиная с 1:400) и в каждой из них отмывают антиген согласно методике постановки реакции Кумбса. Затем (схема 3) делают несколько разведений титруемой антиглобулиновой сыворотки (в нашем примере от 1:10 до 1:250) и добавляют по 0,5 мл каждого разведения этой сыворотки в один ряд пробирок с оставшимся после отмывания антигеном. Объем жидкости в каждой пробирке должен быть доведен до 0,5 мл. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 °C. Результаты учитывают так же, как реакцию агглютинации. За титр антиглобулиновой сыворотки принимают ее наибольшее разведение (в нашем примере 1:80 — 4 ряд), которое выявляет неполные антитела в максимальном титре (1:3200). Для реакции Кумбса антиглобулиновая сыворотка применяется в удвоенном титре (1:40).

РЕЗУЛЬТАТЫ РЕАКЦИИ КУМБСА

N рядов Разведение антиглобулиновой сыворотки Разведения сыворотки, содержащей неполные антитела
1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400
1 1:10 4+ 4+ 4+ 4+
2 1:20 4+ 4+ 4+ 4+
3 1:40 4+ 4+ 4+ 4+
4 1:80 4+ 4+ 3+ 2+
5 1:100 4+ 3+ 2+
6 1:150 4+ 3+
7 1:200 3+ 2+
8 1:250

РПГА является специфичным и высоко чувствительным методом выявления бруцеллезных антител в сыворотке крови человека. Для постановки РПГА необходимо иметь: а) бруцеллезный эритроцитарный антигенный диагностикум; б) контрольные (несенсибилизированные) эритроциты; в) нормальную сыворотку кролика; г) бруцеллезную сыворотку.

Для титрования испытуемых сывороток применяется нормальная сыворотка кролика, инактивированная при 56 °C в течение 30 минут и разведенная физиологическим раствором 1:100.

Испытуемую сыворотку разводят физиологическим раствором 1:25 (0,1 мл сыворотки +2,4 мл физиологического раствора) и инактивируют в течение 30 минут при 56 °C. Перед исследованием сыворотку адсорбируют 50% взвесью контрольных эритроцитов. К 1,2 мл инактивированной сыворотки добавляют 0,2 мл 50% эритроцитов, встряхивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Затем смесь центрифугируют при 1000 об./мин. в течение 2 минут.

Можно оставить сыворотки с эритроцитами на ночь в холодильнике (+4 °C), в этом случае исключается центрифугирование.

Эритроцитарный диагностикум перед применением разводят физиологическим раствором (pH 7,0 — 7,2) согласно указанию на этикетке и получают 2,5%-ную взвесь, которая применяется в РПГА. Контрольные (несенсибилизированные эритроциты также разводят согласно указанию на этикетке и применяют полученную 2,5%-ную взвесь для контроля сывороток).

Реакцию ставят в прозрачных полистироловых пластинках с лунками. Каждую сыворотку исследуют не менее чем в 6 — 8 разведениях, начиная с 1:50. Сначала нормальную разведенную 1:100 инактивированную сыворотку кролика разливают во все лунки по 0,5 мл. Затем в первую лунку (контроль сыворотки) вносят 0,5 мл испытуемой сыворотки, предварительно инактивированной и разведенной 1:25, перемешивают и 0,5 выливают. Во вторую лунку также добавляют 0,5 мл испытуемой сыворотки (1:25), перемешивают, переносят 0,5 мл в третью лунку и титруют сыворотку до конца ряда, из последней лунки 0,5 мл выливают. Таким образом получают ряд последовательных двукратных разведений испытуемой сыворотки, начиная с 1:50, в объеме 0,5 мл.

В первые лунки (контроль сыворотки) добавляют микропипеткой по 0,05 мл контрольных эритроцитов. Затем в каждую лунку, начиная со второй, с помощью микропипетки добавляют по 0,05 мл диагностикума. Пластины осторожно встряхивают до полного перемешивания содержимого лунки, следя, чтобы не было разбрызгивания жидкости, и оставляют при комнатной температуре. Учет реакции проводят через 2 — 3 часа.

При постановке РПГА предусматриваются следующие контроли:

а) контроль качества нормальной сыворотки кролика (1:100) проводят в двух лунках. К 0,5 мл сыворотки добавляют в первую лунку 0,05 мл 2,5% взвеси диагностикума, во вторую — 0,05 мл контрольных эритроцитов;

б) качество диагностикума проверяют путем титрования специфической бруцеллезной сыворотки, начиная с разведения 1:50 до 1:100000. Затем в каждую лунку добавляют по 0,05 мл 2,5% взвеси диагностикума.

Реакция считается специфической, если в контролях исследуемых и контрольной сыворотки отсутствует гемагглютинация, а титр специфической сыворотки в реакции будет соответствовать титру, указанному на этикетке флаконов эритрицитарного диагностикума.

Оценка реакции проводится по следующей схеме:

4+ — эритроциты покрывают все дно лунки равномерным слоем, иногда наблюдается зонтик.

3+ — эритроциты выстилают все дно лунки тонким равномерным слоем, но площадь его меньше, чем при 4-крестовой реакции, размеры зонтика также меньше.

2+ — агглютинат небольшой, расположен в центре лунки.

1+ — вокруг осадка эритроцитов в центре виден небольшой агглютинат.

Отрицательная реакция — осадок эритроцитов на дне лунки в виде пуговки или маленького кольца.

За титр сыворотки принимают ее последнее разведение с оценкой реакции не менее чем 3+. Оценка результатов исследования сывороток на бруцеллез в РПГА у людей: титр 1:50 — реакция сомнительная, титр 1:100 и выше — реакция положительная. При записи результатов РПГА следует указывать титр сыворотки.

Техника постановки РПГА микрометодом.

РПГА может быть выполнена в микрообъемах с помощью микротитратора типа Такачи (или круглодонных микропланшетах с микропипетками), который позволяет проводить титрование в объемах 25 и 50 мкл. Техника постановки реакции, последовательность всех операций такая же, как и при использовании макрометода. Следует учитывать то, что чувствительность микрометода обычно на одно разведение ниже, чем макрометода.

Для постановки реакции в микротитраторе с помощью пипетки-капельницы в каждую лунку вносят разводящую жидкость в объеме 50 мкл. Затем с помощью титраторов с головкой объемом 50 мкл забираем исследуемую сыворотку, погружая в нее головку. Титратор с сывороткой переносят в первую лунку и делают несколько вращательных движений в обе стороны. Затем титратор переносят в следующую лунку и повторяют манипуляцию. Титрование можно проводить одновременно в нескольких рядах. После титрования всего ряда титратор промывают дистиллированной водой путем вращательных движений, удаляют воду из головки с помощью тампона и обжигают ее на пламени горелки.

В лунки после титрования добавляют 25 мкл эритроцитарного диагностикума, разведенного 1:10, пластины слегка встряхивают до получения гомогенной взвеси. Учет проводят через 2 — 3 часа по аналогичной схеме, как и при использовании макрометода.

Метод используют для диагностики всех форм заболевания, а также при эпидемиологическом обследовании населения и при отборе лиц для вакцинации против бруцеллезной инфекции.

Для постановки ИФА используют диагностическую тест-систему, иммуноферментную для определения бруцеллезных антител. Выявление специфических антител в сыворотках людей происходит за счет взаимодействия бруцеллезного антигена (ЛПС), адсорбированного на полистироловом планшете (плоскодонном) с антителами исследуемой сыворотки. Образовавшийся комплекс «антиген + антитело» выявляют с помощью антител против иммуноглобулинов человека, меченных пероксидазой хрена.

Тест-система представляет собой набор ингредиентов для проведения ИФА на твердофазном носителе и включает в себя: бруцеллезный ЛПС (либо планшет, сенсибилизированный этим антигеном), антитела против иммуноглобулинов человека, меченных пероксидазой (конъюгат), контрольные (положительную и отрицательную) сыворотки человека, набор солей, необходимых для приготовления буферных растворов, субстрат — ортофенилиндиамин (ОФД). Твин-20, бычий сывороточный альбумин (БСА), планшеты для ИФА однократного применения.

1. Сенсибилизация твердой фазы. В лунки планшета вносят с помощью дозатора по 200 мкл раствора бруцеллезного антигена в концентрации 10 мкг/мл в 0,02М растворе фосфатно-солевого буфера (ФСБ), pH 7,2. Адсорбцию антигена на планшетах проводят в течение 2 часов в термостате при температуре 37 °C или при 4 °C в течение 18 часов. Затем антиген удаляют встряхиванием планшета с последующей трехкратной отмывкой (по 5 мин.) раствором ФСБ, содержащим 0,1% детергента — твит-20.

2. Внесение исследуемого материала. Испытуемые сыворотки, разведенные 1:200, вносят по 100 мкл в первую лунку ряда и далее последовательно путем двукратных разведений на ФСБ + твин, содержащий 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), раститровывают. Параллельно на каждом планшете ставят отрицательный и положительный контроль. Планшеты встряхивают и выдерживают при 37 °C в течение 1 часа. После чего жидкость удаляют и отмывают планшеты, как указано в п. 1.

3. Внесение конъюгата. В каждую лунку планшета вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении (конъюгат разводят на ФСБ + твин и 1% БСА). Планшеты помещают в термостат на 40 мин., после чего жидкость удаляют, а планшеты отмывают 4 — 5 раз, как указано в п. 1.

4. Проявление реакции. В каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного раствора, содержащего 0,04% ОФД и 0,04% H2O2 в 0,1М цитратно-фосфатном буфере, pH 5,5. Инкубацию проводят при комнатной температуре 15 — 30 мин. и останавливают реакцию внесением 50 мкл 0,5 моль/л серной кислоты.

5. Учет и оценка результатов ИФА. Результат реакции можно учитывать визуально с помощью сравнивания окраски в опытных и контрольных лунках, а также с помощью спектрофотометра типа Multiskan при длине волны 492 нм. Появление желто-оранжевого окрашивания в опытных лунках при его отсутствии в лунках с отрицательными контролями свидетельствует о положительной реакции. При фотометрическом учете результатов проба считается положительной, если оптическая плотность (ОП) в 2 и более раз превосходит наивысшее значение ОП отрицательных контролей.

Диагностическим титром в ИФА считается разведение сыворотки более чем 1:400.

Использование ИФА в эпидемиологической практике.

При проведении массовых обследований на бруцеллез для постановки ИФА может быть использована не сыворотка крови, а цельная кровь. Для этого кровь из пальца, с помощью микропипетки, в объеме 10 мкл вносится в микропробирку с физиологическим раствором в объеме 1 мл. Пробирку встряхивают и затем либо центрифугируют при 1000 об./мин. 5 мин., либо дают отстояться в холодильнике при 4 °C в течение 18 часов. Таким образом получают разведение сыворотки 1:200. Для постановки ИФА используют надосадочную жидкость. ИФА как скрининг-тест можно ставить в 2 лунках микропланшета, при получении сомнительного или положительного результата ИФА повторяют в количественном варианте с последующей раститровкой надосадочной жидкости. При получении положительного результата необходимо исследовать сыворотку крови.

При использовании непрямого ИФМ для обнаружения антител к бруцеллам заранее готовят мазки из 1 — 2 суточной агаровой

9 культуры возбудителя (1 x 10 мкл/мл). На одном предметном стекле делают 8 мазков, фиксируют их в этиловом спирте в течение 30 мин., высушивают на воздухе и помещают во влажную камеру. Исследуемую сыворотку разводят 2-кратно, начиная с разведения 1:2 до 1:320, и наносят пастеровской пипеткой на мазки, начиная с большего разведения. Влажную камеру с препаратом помещают в термостат при 37 °C на 30 мин. Мазок отмывают от несвязавшихся антител и после подсыхания его вновь помещают во влажную камеру, докрашивая антивидовой люминисцирующей сывороткой в рабочем разведении. Дальнейшая обработка препарата ведется, как при прямом иммуннофлюоресцентном методе (см. раздел 4). После просмотра препарата под люминесцентным микроскопом устанавливают титр антител в исследуемой сыворотке.

В качестве контролей служат препараты, в которых бруцеллы обработаны бруцеллезной сывороткой (положительный контроль) и сывороткой, не содержащей антитела к бруцеллам (отрицательный контроль). Диагностическим титром считается титр не менее 1:4.

источник