Меню Рубрики

Бруцеллез анализ крови крс

Автор: Шубина Е. А., технолог, кандидат биологических наук, ФГУП «Щелковский биокомбинат»

Опубликовано: 14 февраля 2011

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Сообщение об этом заболевании, по данным Хаджеса (1897), встречается уже у древнегреческого врача Гиппократа. Первое научное описание бруцеллеза было сделано в 1861 году английским военным врачом Мэрстоном. Широкое распространение среди людей отмечалось в 18 и 19 веках в странах, расположенных в бассейне Средиземного моря.

Изучая причины мальтийской лихорадки, английский врач Д. Брюс в 1886 – 1887 гг. установил, что виновником ее является специфический микрококк, названный им Micrococcus melitensis. Дальнейшие исследования показали, что источником возбудителя мальтийской лихорадки являются козы, пораженные инфекцией, а причиной заражения людей — потребление молока от таких коз. Несколько позже Micrococcus melitensis был выделен у овец.

В1897 г. датские ученые Банг и Стриболд установили, что массовые аборты у коров вызывает микроорганизм, названные B. abortus bovis. В 1914 г. Траум обнаружил очень сходный микроорганизм, названный Br. abortus suis, при массовых абортах у свиней.

Для диагностики бруцеллеза в 1897 г. Райтом была предложена серологическая реакция агглютинации, а в 1922 г. Берне разработал внутрикожную аллергическую пробу, облегчающую распознавание болезни.

Долгое время мальтийская лихорадка у людей и массовые аборты у домашних животных считались самостоятельными заболеваниями. В 1918 – 1920 гг. Ивенс, Мейер и Фезье, изучая биологические свойства возбудителя мальтийской лихорадки и массовых абортов у крупного рогатого скота, обнаружили их чрезвычайную близость. Эти исследования явились основанием объединить указанных возбудителей, в том числе и возбудителя массовых абортов у свиней, в одну родовую группу под наименованием Brucella (в честь Брюса), а вызываемые ими заболевания именовать бруцеллезом.

В России начало изучения бруцеллеза было положено работами Е. И. Марциновского (1911), но детальному изучению заболевание подверглось в различных местностях СССР лишь с 1935 г. Большой вклад в изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных внесли отечественные ученые: С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, Р. А. Цион, А. П. Бессонов и др. Были всесторонне изучены биологические свойства возбудителя, усовершенствованы методы диагностики, показаны значение в борьбе с бруцеллезом вакцинальной профилактики и пути ее совершенствования.

Клинические признаки бруцеллеза у крупного рогатого скота

Длительность инкубационного периода 2 – 3 недели. Первым показателем развившегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в постепенно нарастающих титрах.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Коровы, заразившиеся до покрытия, в большинстве случаев приносят нормальный приплод. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями. При тяжело протекающем эндометрите повышается температура тела, снижаются удои, отмечается потеря веса, убыстряется СОЭ; умеренный лейкоцитоз. Эндометритам нередко сопутствуют серозные или серозно-катаральные маститы. В процессе могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и временному или стойкому бесплодию.

У отдельных животных в связи с абортом или независимо от него можно наблюдать развитие серозных бурситов или серофибринозных артритов. Последние в большинстве случаев возникают в суставах передних конечностей — запястном, путовом, коленном, локтевом. У быков бруцеллез, хотя и редко, сопровождается развитием орхитов и эпидидимитов.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах.

В лабораторию направляются пробы крови (сыворотки) для серологического исследования, абортивный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло), объекты внешней среды.

При массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР). Диагностикумы для этих исследований, а также бруцеллин ВИЭВ для аллергической диагностики готовятся на Щелковском биокомбинате.

Для специфической профилактики бруцеллеза ФГУП «Щелковский биокомбинат» выпускает живые сухие вакцины из штамма B. abortus 19, 82 и 75/79-АВ; инактивированную адъювант — вакцину из штамма B. abortus КВ 17/100.

По данным К. В. Шумилова до 1952 года борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота в нашей стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллезных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма B. abortus 19.

Вакцину из штамма B. abortus 19 применяли до 1970 года. За 20 лет применения вакцины многие хозяйства, даже области, были оздоровлены от болезни. Однако в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась низкой. В первую очередь, это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела, вырабатывающиеся в ответ на введение вакцины, сохраняются в организме животных до 5 – 8 лет и затрудняют дифференциацию иммунизированных животных от больных бруцеллезом.

С 1971 по 1974 год вакцину из штамма B. abortus 19 использовали только на телках 5 – 8 месячного возраста. С 1974 года и по настоящее время в России в комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов B. abortus 82 и 19. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций дифференцировать вакцинированных животных.

За 30 лет работы с применением вакцины из штамма B. abortus 82 и смены пяти поколений коров к 2004 году (К. В. Шумилов) количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов и заболевших животных значительно сократилось.

Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B. abortus 75/79-АВ разработана сотрудниками ВГНКИ и Алтайской НИВС с использованием культуры штамма 75/79, выделенного от коровы, ранее иммунизированной вакциной из штамма B. abortus 82. После многократных пассажей выделенного штамма через организм морских свинок и телок и целенаправленной селекции на питательных средах, был получен новый вакцинный штамм 75/79-АВ. Вакцины не обладает абортогенными свойствами, что дает возможность проводить иммунизацию маточного поголовья независимо от сроков стельности. Вакцина является слабоагглютиногенной; агглютинины и комплементсвязывающие антитела регистрируются у привитых животных в течение трех месяцев после иммунизации, что делает возможным их исследование по истечении указанного срока. У животных, иммунизированных вакциной, выраженный иммунитет сохраняется в течение года, что позволяет за указанный срок оздоравливать неблагополучные хозяйства от бруцеллеза.

Значительный интерес для практики представляет адъювант-вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, сконструированная во ВГНКИ. Вакцина представляет собой эмульсию типа «вода в масле», состоящую из инактивированной культуры штамма B. abortus КВ 17/100 и масляного адъюванта.

Штамм B. abortus КВ 17/100, находящийся в R-форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из вакцинного штамма B. abortus 104М, находящегося в S-форме. Адъювант-вакцина не индуцирует синтез S-бруцеллезных антител в диагностических титрах у животных, не сенсибилизированных бруцеллами. Адъювант-вакцина индуцирует синтез S-бруцеллезных антител у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу.

Адъювант-вакцина не абортогенна и может быть использована для иммунизации маточного поголовья крупного рогатого скота независимо от сроков стельности.

источник

Бруцеллез — это хроническое заболевание, поражающее не только коров, но и свиней, овец, домашних питомцев. При контакте с инфицированным крупным рогатым скотом заражается человек. Употребление непрокипяченного молока, прикосновение к мясу и кожевенному сырью приводят к тяжелому заболеванию.

Источник инфекции — зараженный скот и обслуживающий персонал. Бруцелл переносят грызуны, насекомые, дикие звери. Бактерии поступают во внешнюю среду с истечениями из естественных отверстий. Заражение происходит орально-фекальным, контактным, половым (если практикуют вольную случку), аэрогенным способом. К инфицированию предрасположен общественный скот на пастбище. Предварительный период продолжается от 2 до 9 недель.

Молодняк относительно устойчив к заболеванию по сравнению со взрослыми животными, возможно потому, что бруцеллы предпочитают репродуктивные органы. Бактерии сохраняются в молоке, сыре и мясе, что представляет угрозу для людей. Развитию клинических признаков способствует нарушение условий содержания, а также несбалансированное питание, использование неподготовленных к скармливанию либо испорченных ингредиентов.

С бруцеллами трудно бороться, потому что заболевание развивается в несколько этапов. При попадании в организм бактерии направляются в лимфоузлы. Если животное содержится в комфортных условиях и полноценно питается, иммунная система уничтожает пришельцев. Но когда организм ослаблен, отдельные бактерии выживают и проникают в лимфатические сосуды, а оттуда — в кровь.

Происходит генерализация процесса. Бруцеллы разносятся по всему организму, вызывают аборты у коров и воспаление семенников у быков. Иммунная система снова продуцирует антитела и уничтожает большую часть микробов. В такие моменты относительно эффективны антибиотики. Однако отдельные бактерии спасаются внутри паренхиматозных клеток. Вырабатывают невосприимчивость к антибиотикам и ускользают от антител. Наступает временное выздоровление (ремиссия). При очередном ослаблении иммунной защиты происходит новое обострение.

Главные признаки бруцеллеза — аборты во второй половине стельности. Если отел все-таки произошел, возникает задержка последа, эндометрит, отек вымени, мастит. Потомство рождается ослабленным или нежизнеспособным.

Учитывают эпизоотическую обстановку и клинические симптомы. Коров и молодняк старше 12 месяцев исследуют на бруцеллез ежегодно. Если молоко с данной фермы поставляют в дошкольные учреждения или школы, коров тестируют каждые 6 месяцев. Практикуют серологические, бактериологические, а также аллергические лабораторные исследования, кольцевую реакцию с молоком. Отбирают абортированные плоды или кусочки плаценты и направляют в лабораторию.

Диагноз считают подтвержденным в следующих ситуациях:

  • выделена культура бруцелл из патматериала;
  • биопроба дала положительный результат;
  • серологический тест оказался позитивным;
  • результаты РСК и аллергического теста оказались положительными.

Для начала ликвидационных мероприятий исключают нижеперечисленные заболевания с похожей клиникой:

  1. Аборты, не связанные с инфекционными заболеваниями.
  2. Лептоспироз.
  3. Сальмонеллез.
  4. Трихомоноз.
  5. Хламидиоз.

После подтверждения диагноза на ферму накладывают карантин. Мероприятия по оздоровлению согласуют с местной государственной ветеринарной инспекцией. Дезинфицируют коровники, прилегающую территорию. Обеззараживают навоз. Клинически больных животных отправляют на убой.

Условно здоровых вакцинируют, если это предусмотрено планом оздоровления стада. Проводят серологическое тестирование каждые 2–4 недели. Положительно прореагировавших выбраковывают. Если оздоровление стада с применением вакцин не привело к ожидаемому результату, все поголовье сдают на мясо.

Профилактика состоит в приведении параметров содержания и кормления в соответствие с зоогигиеническими нормативами, а также использовании искусственного осеменения.

Читайте нас также во Вконтакте и Одноклассниках. Приглашаем в наши сообщества.

источник

Бруцеллез крупного рогатого скота это факторная бактериальная инфекционная болезнь животных этого вида, которой свойственна эстафетная передача возбудителя инфекции. Инфекционный процесс характеризуется скрытым течением, переходящим в хроническое. Кульминацией такого процесса являются происходящие один раз в жизни аборты, преимущественно, нетелей, реже — взрослых коров. Еще П.Ф.Здрадовский (1948) подтвердил, что коровы при бруцеллезе абортируют только один раз в жизни. По его мнению, матка в результате соприкосновения с возбудителем инфекции «премунизируется» и приобретает устойчивость к суперинфекции. Этот важный эпизоотологический показатель до последнего времени мало учитывали при проведении профилактических и оздоровительных мероприятий.

Вертикальная передача возбудителя инфекции, от родителей к потомству, обеспечивает его выживание в природе. Эта же передача является причиной длительного неблагополучия по бруцеллезу стад и ферм Горизонтальная передача возбудителя инфекции происходит преимущественно в период аборта коров. Ее реализуют алиментарный и контактный механизмы передачи возбудителя инфекции. Бруцеллезом крупного рогатого скота болеют люди и парнокопытные животные некоторых других видов. На основе многочисленных эпидемиологических наблюдений и экспериментов, П.А.Вершилова и А.А.Голубева исключают возможнуюь роль людей, как источников возбудителя бруцеллеза. Возбудитель инфекции у людей всегда попадает в биологический тупик. Наблюдали только казуистические случаи заражения человека от человека, например, при оказании родовспоможения

Бруцеллез крупного рогатого скота распространен весьма широко. Но проникновение возбудителя этой инфекции к непарнокопытным (зайцы, лошади, собаки, кошки и др.) как и к человеку завершается тупиковой ситуацией, хотя и вызывает тяжелое их переболевание. К таким животным и человеку возбудитель инфекции проникает только горизонтальным путем от своего облигатного хозяина.

Этиология: возбудителем бруцеллеза крупного рогатого скота является Brucella abortus. Этот микроб закономерно переживает в организме крупного рогатого скота. Процесс его жизнедеятельности в организме облигатного хозяина происходит в виде S- , R- и L-форм. Br. abortus всесторонне изучена. Интересующихся отсылаем к книге «Бруцеллез сельскохозяйственных животных» под редакцией И.А.Косилова (1999)

Диагностика: для постановки диагноза на бруцеллез учитывают клинические, эпизоотологические данные и результаты лабораторного (бактериологического и серологического) исследований.

Клиническая диагностика включает систематический сбор информации от владельцев животных и обслуживающего персонала о состоянии здоровья животных. Основным клиническим признаком являются аборты коров разного возраста, но преимущественно первотелок, с последующей послеабортной патологией (задержание последа, эндометриты, нарушение сроков инволюции матки и др.). В неблагополучных стадах такая патология просматривается у некоторых коров после нормального отела. Если в таких стадах проводят оздоровительные и профилактические мероприятия, аборты бруцеллезной этиологии происходят среди значительного числа нетелей.

Эпизоотологическая диагностика дополняет клиническую. Учитывают имевшую место интродукцию на ферму животных из других хозяйств, особенно неблагополучных по бруцеллезу и оздоровленных от этой инфекции. Не менее важно устанавливать благополучие местности, из которой завозили корма; выяснять эпизоотическую ситуацию тех мест, где заготавливали, хранили и перерабатывали завезенные корма. Большое внимание уделяют выяснению вероятности контаминирования таких кормов в транспортных средствах, в которых их перевозили. Эти данные позволяют достаточно точно предполагать, откуда, и какими факторами занесен в хозяйство возбудитель инфекции.

Лабораторная диагностика. Ее проведение обязательно для подтверждения диагноза. В ветеринарную лабораторию посылают абортированный плод и сыворотку крови коровы, у которой произошел выкидыш. Там проводят бактериологическое и серологическое исследования по РА и РСК. Есть много других серологических реакций весьма полезных для уточнения диагноза. Но для подтверждения диагноза достаточно провести исследование по РА и РСК.

Этими же реакциями ежегодно проверяют благополучие стада по бруцеллезу крупного рогатого скота. Их же используют для оздоровления неблагополучных ферм. Таким образом показателями неблагополучия по бруцеллезу ферм и хозяйств являются аборты коров разного возраста, послеродовая патология, и положительные результаты бактериологического и серологического исследования в ветеринарных лабораториях.

Эпизоотология: бруцеллез в нашей стране регистрируют с начала прошлого века. Имеются данные, что этой болезнью болели люди в Москве, Ашхабаде, Ташкенте еще в 1910-1912 гг. Исследователи, диагностировавшие эту инфекцию, полагают, что ее причиной был возбудитель овечьего типа.

Бруцеллез крупного рогатого скота первоначально регистрировали в тридцатые годы в тех местах, куда завозили племенных животных из стран Западной Европы. Несовершенство методов диагностики и оздоровления ферм от этой инфекции и годы военного лихолетья способствовали ее укоренению в определенных регионах. В таких местах бруцеллез стали регистрировать во многих животноводческих хозяйствах.

Интенсивную работу по оздоровлению от этой инфекции неблагополучных ферм начали проводить в пятидесятые годы. В те годы проводили массовые исследования сыворотки крови крупного рогатого скота первоначально реакцией агглютинации (РА), а в последующем дополнительно реакцией связывания комплемента (РСК). Эта работа позволила уточнить эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Для представления об эпизоотологии этой инфекции важно понять тенденции проявления эпизоотического процесса и особенности распространения инфекции в различные периоды такого проявления.

В ранее благополучные стада инфекцию заносят, как правило, интродукцией скрытых бруцеллоносителей из неблагополучных или ранее оздоровленных хозяйств. То же происходит при завозе кормов, контаминированных возбудителем бруцеллеза. Возможны и другие факторы заноса возбудителя инфекции. Но животные чаще всего заражаются алиментарно, поедая контаминированные возбудителем инфекции корма. Если произошло единичное заражение животного, то инфекция распространяется вяло до первого аборта бруцеллезной этиологии. Даже один аборт создает обширную контаминацию возбудителем этой инфекции предметов внешней среды, в том числе и кормов. Крупный рогатый скот на благополучной по бруцеллезу ферме весьма чувствителен к этой инфекции. Заразившись, у животных не просматриваются клинические признаки болезни. Только некоторые реагируют по РА в титрах 1:200 — 1:400 и выше. Применение в таком стаде вакцины резко обостряет клиническое и эпизоотологическое проявление инфекции и в короткие сроки приводит к массовым абортам с различной клинико-гинекологической патологией.

Но через 8-12 месяцев ситуация заметно меняется. Многие из абортировавших коров нормально оплодотворяются и приносят здоровый приплод. Реже встречается и более легко протекает акушерско-гинекологическая патология. Но ввод в такое стадо нетелей, как правило, заканчивается абортами. Безусловно, при этом в пределах фермы резко возрастает рассеивание возбудителя инфекции. Но оно не оказывает такого влияния на клиническое проявление болезни и серологические показатели сыворотки крови, как это были после первых абортов в ранее благополучном по бруцеллезу стаде.

Телята, родившиеся от больных коров, как правило, не реагируют на принятые серологические реакции до 6 — 9-месячного возраста и старше.

Еще П.Ф.Здродовский описал опыт, в котором телятам до 6-7-месячного возраста выпаивали молоко от больных бруцеллезом коров, и их сыворотка крови продолжала реагировать отрицательно по РА. Но эти телята заболевали бруцеллезом после первого отела.

М.М.Халимбеков (1937) выделил возбудителя бруцеллеза у 6-месячного теленка, родившегося от ранее абортировавшей больной этой инфекцией коровы. А.И.Коновалов (1953) пришел к выводу, что телята, родившиеся от больных бруцеллезом коров, являются источниками возбудителя инфекции при переводе в другое хозяйство. Г.А.Объедков (1970) подтверждает факты выделения возбудителя бруцеллеза из органов (в первую очередь, из содержимого желудка) абортированного плода. В этой же работе он называет исследователей, которые отрицали возможность проникновения возбудителя этой инфекции в организм плода и внутриутробное заражение эмбриона. Такое отрицание они обосновывали превосходством величины молекулы антител над размером пор плаценты у коров.

Но установленные факты роли скрытых бруцеллоносителей в эпизоотическом процессе этой инфекции ориентирует на пересмотр взгляда на внутриутробное заражение.

Читайте также:  Актриса которая умерла от бруцеллеза

Изъятие из основного маточного стада положительно реагирующих после регулярных серологических исследования позволяет оздоровить такое стадо, если в него не вводят нетелей, выращенных от больных бруцеллезом коров. Такой результат получают в тех случаях, когда оздоровление проводят регулярными серологическими исследованиями сразу же после установления неблагополучия. Этого же добиваются в тех случаях, когда исследования проводят через 25-30 дней после провокации скрытого бруцеллоносительства вакциной из штамма 82 или, какой либо другой.

В других ситуациях после оздоровления регулярными серологическими исследованиями, в стаде остаются скрытые носители возбудителя инфекции. Они через определенное время становятся причиной рецидива вспышки. В таком случае неблагополучие стада продолжается уже за счет клинически больных и положительно реагирующих на серологические реакции.

Особо сложной оказывается эпизоотическая ситуация в тех стадах, которые регулярно ремонтируют нетелями, выращенными от больных бруцеллезом коров. Как уже отмечали, в таких стадах возбудитель инфекции распространяется преимущественно после абортов нетелей. Но часть коров основного стада остаются скрытыми носителями возбудителя бруцеллеза, а у других сформировалась определенная премуниция. Поэтому ситуацию характеризуют, как клиническое и эпизоотологическое затишье, резко отличающееся от первых месяцев заноса инфекции в стадо, а, тем более, от ситуации после вакцинации в то время животных.

Эпизоотическую ситуацию усложняют скрытые носители возбудителя инфекции и регулярный ввод в стадо нетелей, выращенных из телят, родившихся от больных бруцеллезом коров. Эти нетели длительное время оставались скрытыми носителями возбудителя бруцеллеза.

Особенности эпизоотической ситуации бруцеллеза крупного рогатого скота продолжительно неблагополучного по этой инфекции целесообразно иллюстрировать примером. Колхоз «Новый путь» Барабинского района Новосибирской области имел два населенных пункта: крупное село Белово и небольшая деревня Красулино. Молочно-товарные фермы в этих населенных пунктах числились неблагополучными по бруцеллезу более 12-14 лет. Основное маточное стадо содержали в с. Белово, а д. Красулино определили как изолятор. Почти ежемесячными многократными исследованиями сыворотки крови коров по РА и РСК, удалось оздоровить от бруцеллеза поголовье скота в с. Белово. Но изолятор в д. Красулино оказался чрезвычайно перегруженным коровами. Животные в нем характеризовались лучшими продуктивными показателями, чем в с. Белово. К тому же среди них не отмечали абортов, и многие реагировали отрицательно по РА и РСК. По согласованию с ветеринарным отделом в этом изоляторе выделили 45 коров, трехкратно с интервалом три месяца отрицательно реагирующих по РА и РСК. Их возвратили в с. Белово, где разместили обособленно с 46 здоровыми местными коровами и нетелями. В те годы (1955) фермы оздоравливали без использования вакцин. Многократные в течение двух лет серологические исследования сыворотки крови этих животных показывали отрицательные результаты. Но осенью 1957 года среди нетелей, выращенных из телят, полученных от этих коров, были отмечены аборты. Многие из них при исследовании по РА и РСК реагировали в титрах 1:200 — 1:400 и выше. Диагноз на бруцеллез подтвердили бактериологическим исследованием.

Такие особенности эпизоотического процесса этой инфекции крупного рогатого скота характерны для большинства неблагополучных пунктов.

В годы, когда скрытое бруцеллоносительство не учитывали при проведении оздоровительных мероприятий с помощью вакцины из штамма 82, ее применение стихийно способствовало провокации такой формы инфекции. Это способствовало предупреждению использования части таких животных для воспроизводства стада и, соответственно, уменьшению числа рецидивов вспышек. В последующем сознательное использование провокации скрытых форм инфекции обеспечило нарастание этой тенденции. Такая мера стала гарантией полного оздоровления ферм от бруцеллеза, в том числе без последующих рецидивов вспышек этой инфекции.

Когда при проведении оздоровительных мероприятий стали принимать во внимание скрытое бруцеллоносительство у молодых животных, выращенных из телят, родившихся от больных этой инфекцией коров, рецидивы вспышек бруцеллеза резко сократились. Это открыло возможности полного оздоровления крупного рогатого скота в хозяйствах региона от этой коварной инфекции.

Повышение эффективности диагностики путем провокации скрытых форм бруцеллеза. Этому вопросу на современном уровне изученности бруцеллеза крупного рогатого скота надо придавать особое значение. Главная опасность в поддержании неблагополучия по этой инфекции стад животных представляли скрытые бруцеллоносители. Таких животных не удается выявить принятыми диагностическими тестами. А интродукция скрытых бруцеллоносителей в благополучное стадо или их содержание в своем стаде до определенного периода становится причиной вспышек этой инфекции.

Такую ситуацию в значительной степени предупреждает изоляция молодых животных, полученных от больных бруцеллезом и положительно реагирующих на серологические реакции, коров. Эта мера предусмотрена Правилами профилактики и борьбы с бруцеллезом, утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18 июня 1996 года.

Но диагностику скрытой формы бруцеллеза у животных можно проводить с помощью ее провокации. Еще П.Ф.Здродовский рекомендовал использовать внутривенное введение аллергена с диагностической целью. Такое введение провоцировало скрытые формы бруцеллеза. К сожалению, эта идея длительное время не получала развития и не исследовалась. Только А.С.Мангазеева, под руководством И.А.Косилова, выполнила работу, которой убедительно доказала, что вакцина из штамма 19 провоцирует синтез антител у животных со скрытым естественным течением бруцеллеза.

Эффективным средством провокации таких форм бруцеллеза может быть применение вакцины из штамма 82. Известно, что эта вакцина не агглютинабельна. Анализ результатов серологических исследований после ее применения в стадах, оздоровленных и неблагополучных по этой инфекции, убедительно подтверждает ее провокационные возможности.

Болотнинский район Новосибирской области до 1970 года был благополучным по бруцеллезу крупного рогатого скота. В последующем инфекция распространилась на 27 населенных пунктов. Для их оздоровления с 1976 года практиковали прививку 4-6 месячным телятам вакцины из штамма 82. С 1979 года эту же вакцину применили выборочно коровам после отела. Хотя поствакцинальные исследования проводили далеко не в лучшие сроки для выявления спровоцированных ею скрытых носителей возбудителя этой инфекции, но к 1982 году обеспечили полное оздоровление хозяйств района от этой инфекции по принятым критериям. Было сформировано стадо в 14 тыс. коров, отрицательно реагирующих по РА и РСК.

С целью изъятия из стада скрытых бруцеллоносителей и предупреждения рецидивов инфекции в 1982 и 1984 гг. всех коров привили вакциной из штамма 82, в 1985 и 1986 гг. провели их ревакцинацию, а в 1987 году вакцинировали в третий раз. Разумеется, после каждой вакцинации животных исследовали на предмет установления спровоцированных скрытых бруцеллоносителей. Уже через 7-10 месяцев после первой вакцинации реагировали положительно по РА и РСК 4,1 % коров. Характерно, что из общего числа положительно реагирующих только 5,5 % реагировали по РА и все в разведении два креста. При втором исследовании число реагирующих животных сократилось до 0,6 , а при третьем до 0,3 % и на 99 % они реагировали по РСК.

При первом исследовании после второй вакцинации (ревакцинации) положительно реагировало менее 1 % исследованных коров. При втором и третьем исследовании этот показатель снизился до 0,3 — 0,5 % и почти все положительно реагирующие выделены только по РСК в низких разведениях (два и три креста).

Третью вакцинацию провели в 1987 году. Через 7 — 10 месяцев после ее проведения выявили 1,8 % положительно реагирующих от числа животных на фермах. Последующие 5 исследований дополнили число положительно реагирующих до 2,9 %.

Характерно, что после первой, второй и третьей вакцинации животные положительно реагировали по РА в высоких разведениях (три и четыре креста) преимущественно при первых исследованиях.

По-иному проявляются серологические реакции при исследованиях крупного рогатого скота в неблагополучных пунктах. На трех таких фермах после очистки стад от положительно реагирующих до выявления только единичных случаев в 1982 году привили вакциной из штамма 82 все 842 коровы. После этого за три с половиной года животных исследовали от 6 до 10 раз. При этом 34,7 % от числа коров на фермах оказались положительно реагирующими по РА и РСК. При последнем исследовании выявили всего 15 положительно реагирующих коров, или 1,8 %. Таким образом, число положительно реагирующих закономерно сокращалось при каждом последующем исследовании.

Ревакцинацию этих животных провели в 1985-1986 гг. Уже при первом исследовании через 7-10 месяцев после прививки выявили положительно реагирующих по РА и РСК 5,8 % от числа коров на фермах или в три раза больше, чем при последнем исследовании перед прививкой. При последующих исследованиях число положительно реагирующих значительно сокращалось. Уже после пятого исследования выделили всего по 1-3 коровы с положительными серологическими реакциями.

Но полностью без положительно реагирующих животных оказалось только 12-е исследование. Всего после второй вакцинации выделили 8,9 % положительно реагирующих по РА и РСК от всего поголовья коров на исследуемых фермах.

Таким образом, в оздоровленных от бруцеллеза стадах, по критериям действующих правил, вакцина из штамма 82 способствует выявлению скрытых бруцеллоносителей. Такие животные представляют небольшую эпизоотическую опасность в своих стадах. Но они весьма опасны, как источники возбудителя инфекции при переводе на благополучные по этой инфекции фермы. Применение вакцины из штамма 82 животным в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах создает у них некоторый иммунитет, но более важно то, что ее применение способствует глубокой очистке стад от скрытых бруцеллоносителей.

Профилактика и оздоровление ферм. Профилактику бруцеллеза крупного рогатого скота обеспечивают уровнем ветеринарно-санитарной культуры животноводческих ферм. Места стоянок животных, трассы их перегонов, пастбища надо обустраивать таким образом, чтобы исключить возможность контактов с посторонними животными и вероятность поедания случайно попавших кормов. Такой профилактике уделяют много внимания, поскольку бруцеллез крупного рогатого скота инфекция факторная с вертикальным и горизонтальным путями передача возбудителя инфекции. Эстафетное распространение болезни обеспечивается фактором контаминирования кормов ее возбудителем и, соответственно, оральным механизмом заражения.

Большое значение в профилактике этой болезни принадлежит внимательной проверке допустимости каждого нового пополнения стада. Такую работу проводят задолго до завоза животных в хозяйство. Уточняют благополучие хозяйств-поставщиков по бруцеллезу не только на день реализации животных, но и за 2 — 5 лет до этого. Крайне нежелательно приобретение вакцинированных животных, так как они могут быть скрытыми носителями возбудителя этой инфекции. Надо иметь в виду, что длительная транспортировка животных является стрессовым воздействием на них, способным обострить инфекционный процесс. Поэтому, таких животных через 7 — 14 дней после доставки в хозяйство целесообразно проверить серологической реакцией РА и содержать изолированно до завершения первого отела.

Также контролируют безопасность, завозимых в хозяйство различных кормов. Учитывают эпизоотологическое благополучие не только мест их заготовки, хранения и погрузки в транспортные средства, но и вероятность контаминирования возбудителем бруцеллеза транспортных средств. Зачастую для перевозки животных, в том числе больных, и кормов для них используют одни и те же транспортные средства. Загрузка кормов в транспортные средства, которые до этого перевозили больных животных, формирует сильный фактор передачи возбудителя инфекции.

Вероятными факторами передачи возбудителя бруцеллеза могут быть рынки, выставки, трассы перегона животных. Такие факторы традиционные. Они давно известные и находятся под надежным контролем ветеринарных инспекторов.

Таким образом, основное внимание в профилактике бруцеллеза крупного рогатого скота уделяют предупреждению интродукции скрытых носителей возбудителя этой инфекции и завоза кормов, контаминированных больными животными. Мероприятия, направленные на оздоровление неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота ферм отличаются в зависимости от стадии проявления эпизоотического процесса. В период развития эпизоотии, когда болезнь первоначально установлена только серологическими методами, очень важно очистить стадо от зараженных этой инфекцией скрытых носителей ее возбудителя. Для этого проводят регулярные серологические исследования. К сожалению, далеко не всегда удается добиться желаемого результата. Применение вакцин в этот период резко обостряет клиническое проявление бруцеллеза. Поэтому их не используют. Основное внимание уделяют подготовке условий для обезвреживания абортированных плодов и мест, где произошел выкидыш, изоляции абортировавших коров и своевременному проведению этих работ.

В период максимального распространения и угасания эпизоотии, мероприятия по оздоровлению животных от бруцеллеза зависят от удельного веса больных в неблагополучном стаде. Если число больных превышает 30-40%, то целесообразно все стадо с приплодом реализовать на мясо. После очистки фермы, ее санитарного ремонта и дезинфекции, а также выдержки без животных в летний период, на ней размещают ремонтный молодняк, приобретенный в благополучном по этой инфекции хозяйстве. Приобретение осуществляют за счет средств, вырученных от реализации неблагополучных по бруцеллезу животных.

Если в этот период эпизоотии при серологических исследованиях выделяют только единичных положительно реагирующих животных, то целесообразно все стадо подвергнуть провокации на предмет обострения скрытого бруцеллоносительства. Эта мера позволит выявить таких животных и изолировать из стада, как опасных потенциальных источников возбудителя инфекции. Это позволит предупредить рецидивы инфекции и прекратить выделения единичных положительно реагирующих на серологические реакции животных. Провокацию скрытого бруцеллоносительства проводят с помощью вакцины из штамма 82. Через 20-30 дней после такой вакцинации животных исследуют по РА.

Одним из основных компонентов профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота является предупреждение использования для ремонта стада, животных, выращенных из телят, полученных от больных этой инфекцией или положительно реагирующих коров по серологическим реакциям.

Независимо от надежности проведения этого мероприятия, всех телят в 6-8 месячном возрасте подвергают провокации с помощью вакцины из штамма 82 (или других вакцин в малых дозах). Через месяц после этого их проверяют по РА для выявления скрытых носителей возбудителя инфекции.

источник

Анализы у коров, быков, молодняка, берут в связи с выявлением определённых заболеваний. В законодательстве закреплен забор крови у КРС 2 раза в год на лейкоз, туберкулёз и бруцеллёз. Исследование крови телят проводят 1 раз в год. Отказ от забора крови приводит к штрафу владельцев животных.

Тест пластины для проведения теста по определению субклинического мастита у коров

Кроме плановых исследований, анализы берут при проведении профилактических мероприятий. Смотрят количество лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов, уровень гемоглобина. При подозрении на мастит у коровы исследуют молоко. Во избежание развития остеомаляции, послеродового пореза проводят биохимический анализ мочи.

Перед тем как начать процесс доения, оператор осматривает вымя корове, проверяет молочную железу на наличие мастита. Мастит относится к инфекционным заболеваниям. Возбудителем является стафилококк. В вымя он проникает различными путями:

  • через повреждения кожи; при нарушении режима доения, несоблюдении правил ухода за выменем, на коже появляются трещины, через которые проникают болезнетворные бактерии; при укусе насекомого может развиться воспалительный процесс;
  • кишечная палочка, грибы и стафилококки попадают в вымя из желудка коровы через мягкие ткани;
  • при медикаментозной терапии происходит нарушение микрофлоры в тканях вымени; снижается иммунитет, развивается патологическая микрофлора.

При пальпации молочной железы отмечаются уплотнения. Они возникают в отдельных или во всех долях железы. Вымя становится жёстким, воспалённым, красноватым. Развивается отёчность, железа увеличивается в размерах. Корова испытывает болезненные ощущения при движении и во время процесса доения. Для подтверждения заболевания или опровержения подозрений на мастит, у животного берут на анализ молоко: перед доением сцеживают первые капли.

Исследования на мастит у коров проводят с использованием 5% раствора «Димастина». Берут молочно-контрольную пластику МКП-2. На ней есть 4 углубления для каждой доли вымени, в них сцеживают молоко: по 1 мл в каждую ячейку. В молоко добавляют реактив. Вращают пластинку в горизонтальном положении 15-30 секунд. Анализируют состояние молока:

  • мастита нет, если консистенция жидкости не изменилась;
  • анализ положительный, если молоко приобрело консистенцию желе; в лунке заметен сгусток;
  • если жидкость стала гуще, но желе и сгустка не образовалось, то реакция сомнительная; требуются дополнительные исследования.

При мастите определяется повышенная кислотность. В норме рН 6,5 – жидкость в МКП белое. Если цвет изменился и стал жёлтым, то кислотность выше нормы. Красный цвет указывает на повышенное содержание щёлочи. Молоко приобретает малиновый, пунцовый цвет при ярко выраженной щёлочности.

Вместо «Димастина» могут использовать 10% раствор «Мастидина». Исследования проводят идентичным способом, но цвет жидкости при нарушении рН будет другим:

Полезная информация
1 светло-сиреневый оттенок – кислотно-щелочной баланс в норме
2 белый цвет молока – повышенная кислотность
3 тёмно-сиреневый – повышенная щёлочность

Если в какой-либо ячейке обнаружился стафилококк, то проводят дополнительные исследования с использованием 2% раствора «Мастидина». Если молоко изменило свою консистенцию и цвет, то применяют методику отстаивания.

У коровы берут последние молоко, по 10 мл из каждой доли железы, которая показала положительную реакцию. Молоко помещают в пробирки, которые ставят в холодильник, чтобы оно не скислось. Анализ проводят на 2 день. Если содержимое пробирок не изменилось, то мастита у животного нет. При наличии следующих признаков отмечается положительная реакция на заболевание:

  • появление водянистости;
  • выпадение осадка в виде хлопьев;
  • тягучесть сливок; они становятся слизистыми;

Корову, у которой определился мастит, отделяют от стада и начинают лечение. Процесс доения проводят 2 раза в день, как животное привыкло. Частый забор молока приведёт к увеличению лактации, что вызовет осложнение заболевания. Молоко использовать для питья или для кормления теленка нельзя. Жидкость уничтожают.

Анализ крови выявляет широкий спектр заболеваний. Забор проводят утром, перед кормлением и доением. Исследуют удельный вес крови, РОЭ, вязкость, свёртывание, химический состав.

Данные показатели позволяют выявить какую-либо патологию, назначить правильную терапию, откорректировать рацион питания.

  • Удельный вес крови у КРС в норме – 1,040-1,059 ед. Пониженный показатель определяется у животных, страдающих истощением и анемией. Высокий удельный вес указывает на нефрит, повышенное содержание сахара в крови, лихорадку, развитие воспалительного процесса в организме.
  • Вязкость крови у быков и коров в норме – 4,6-5,2 ед. Понижение вязкости происходит при истощении и анемии. Повышенная вязкость отмечается при плеврите, перитоните, воспалении лёгких.
  • По замедленной скорости свёртывания крови определяют такие заболевания как нефрит, сибирская язва, гемофилия. У КРС – она в норме 5-6 мин. Повышенный показатель определяется при развитии крупозного воспаления лёгких, при геморрагических анемиях.
  • РОЭ по методу Панченкова в норме у взрослых животных 0,5-1,5 мм за 1 ч. У молодняка скорость оседания эритроцитов выше. При анемии, ангине, кровопятнистой болезни наблюдается повышенная РОЭ. Заниженный показатель выявляется при желтухе, гастроэнтерите. У быков невысокая РОЭ может развиваться при миоглобинурии: заболеванием страдают животные с высокой мышечной массой.
  • У здоровых животных уровень гемоглобина в крови 9,4-12,5. Снижение гемоглобина вызывает патологические процессы в организме. Коровы страдают анемией. У них появляется желтушность тканей, увеличиваются почки, печень, селезёнка. Кровь приобретает коричневый оттенок, становится водянистой.

Последствия сниженного гемоглобина – дистрофия мышечных тканей, в том числе сердечной мышцы. Дисфункции и дистрофия внутренних органов.

  • Определяют количество билирубина в крови. Норма для КРС составляет 0,01-0,30 мг. При повышенном билирубине диагностируется гепатоз: патологические изменения в печени.
  • Норма белка в крови у взрослых животных составляет 6,8-9,0 г%. Увеличение или снижения уровня белка приводит к нарушению обмена веществ.
  • Корова здоровая, если анализ показал уровень каротина – 0,5-4 мг%. Недостаток витамина «А» приводит к атрофии мышц, воспалению слизистых оболочек, потере зрения. Особенно важно отслеживать уровень каротина у коров в период беременности. Нехватка витамина может вызвать самопроизвольные роды.
  • Кровь берут на анализ, чтобы выяснить уровень кальция в крови. У здоровых животных его – 9,5-12,5 мг%. Снижение уровня приводит к развитию остеомаляции, рахиту у молодняка, анемии, лейкемии. Повышенное количество кальция вызывает сердечную недостаточность у коров, деформацию суставов.
  • Чтобы предотвратить заболевания опорно-двигательной, сердечнососудистой системы проверяют уровень фосфора в крови. Его норма составляет – 4.5-7,5 мг%.
Читайте также:  Акт на бруцеллез крс образец

Общий и биохимический анализ крови позволяет оценить состояние организма. При хорошем уходе за животными, сбалансированном питании, все показатели будут в норме. Отклонения указывают на развития заболеваний внутренних органов животного, нарушение обмена веществ.

Лейкоз относится к хроническим опухолевым заболеваниям. Иногда он не проявляет никаких симптомов, поэтому важно провести у коров забор крови на анализ. В некоторых случаях появляются признаки лейкоцитоза. Разрастаются кроветворные и лимфоидные клетки во внутренних органах. Возбудителем лейкоза является онкорновирус. В организм здорового животного он попадает от больной особи. Лейкоз передаётся через молоко и мясо, поэтому сырьё от лейкозных коров и быков подлежит выбраковке и уничтожению.

У животных изменяется состав крови. Происходит постоянное увеличение уровня лейкоцитов:

  • предлейкозная стадия – 14 тыс./мкл; внешних симптомов нет;
  • начальная стадия – от 15 до 40 тыс./мкл; внешние признаки заболевания не развиваются;
  • развёрнутая стадия – 40*10 9 /л; лимфатические узлы становятся больше, сердце увеличивается, пульс слабого наполнения; у коров развиваются отёки в области подгрудка и межчелюстного пространства.

источник

Возбудитель бруцеллеза поражает опорно-двигательный аппарат коровы. Инфекция оказывает негативное влияние на репродуктивную функцию скота. Патогенные микроорганизмы могут передаваться от животных к человеку через мясо и молоко. Бруцеллез у коров называют также мальтийской лихорадкой. Вредоносные бактерии способны сохранять болезнетворные свойства в течение 2-4 месяцев.

Вредоносные бактерии могут присутствовать в воде и корме. Патогенные микроорганизмы попадают на слизистую животных через предметы ухода. Заводчику необходимо постоянно следить за чистотой инвентаря. Инфекция может присутствовать в фекалиях животных. Чаще всего бруцеллез поражает стадо в пастбищный период.

Важно! Инфекция передается при контакте с больными особями. Вспышки заболевания возникают после завоза новых животных.

В организм крс болезнетворные бактерии проникают через микротрещины на коже и слизистых. Животные заболевают после поедания комбикорма, содержащего возбудителей бруцеллеза. Патогенные микроорганизмы могут присутствовать в питьевой воде. Инфекция передается через органы дыхания. При подозрении на бруцеллез необходимо немедленно изолировать больных коров.

Существует риск заражения бруцеллезом специалистов, которые работают со скотом. Бактерии способны проникать в организм человека через кожу. Патогенные микроорганизмы могут попасть в дыхательную систему человека.

Различают 3 формы бруцеллеза:

  1. Острая стадия длится в течение 1-2 месяцев.
  2. Продолжительность подострой стадии составляет 3 месяца.
  3. При отсутствии лечения заболевание переходит в хроническую форму.

Бруцеллез можно распознать по следующим признакам:

  • животное теряет аппетит;
  • у него снижаются продуктивные показатели;
  • у коровы воспаляются суставы на конечностях;
  • инфекция проникает в половые органы и вызывает увеличение количества выкидышей;
  • больное животное с трудом передвигается по пастбищу.

Вредоносные бактерии влияют на развитие плода. У коров рождаются нежизнеспособные телята. У некоторых особей повышается температура. Бруцеллез крс приводит к резкой потере веса. Снижение иммунитета увеличивает скорость распространения инфекции.

У коров, зараженных после покрытия, чаще всего рождается нормальный приплод. Выкидыши происходят на 5-8 месяц беременности. За несколько дней до родов у коров начинаются обильные гнойные выделения. После аборта можно заметить признаки эндометрита.

В семенниках быков начинается воспалительный процесс. Повреждение тканей половых органов приводит к бесплодию. Его можно распознать по снижению удоев и падению веса. Ветеринары просто не успевают вылечить больное животное.

Важно! Инфекция способна за короткое время поразить всё стадо. В особо тяжелых случаях владельцы вынуждены прибегать к санитарному убою.

Чтобы выявить возбудителя, специалисты применяют бактериологический метод. Исследование на бруцеллез заключается в проведении серологического анализа. В лабораторию направляют пробы крови, которые берут у больных животных. Для постановки диагноза используются также истечения из родовых путей.

В случае убоя специалисты изучают пораженные суставы и семенники. Инфекцию выявляют за счёт аллергической реакции Райта. При этом специалисты используют антиген, который вызывает у зараженного животного положительную реакцию.

В качестве материала используются ткани зародыша, молоко или кровь больного животного. В тело коровы вводится Абортин. По реакции на этот препарат можно с высокой точностью поставить диагноз.

Избавиться от инфекции можно за счёт антибактериальных препаратов. Ветеринары добиваются положительного эффекта за счет применения следующих средств:

  • Рифампицин;
  • Левомицетин;
  • Стрептомицин;
  • Тетрациклин.

Антибиотики препятствуют развитию инфекции на начальной стадии заболевания. При появлении первых признаков заражения необходимо провести вакцинацию всего стада.

Важно! Хроническая форма бруцеллеза практически не поддается лечению. Для предотвращения распространения инфекции в стаде используется вакцина против бруцеллеза.

Избежать инфицирования коров можно, если провести вакцинацию всего стада. Следите за поведением поголовья. При появлении первых признаков бруцеллеза необходимо отделить больное животное от основного стада.

Заболевание может быть связано с неправильным хранением кормовых запасов. Необходимо уделять внимание условиям содержания животных. Заводчик должен принимать меры для повышения иммунитета коров. Эти методы способны предотвратить заражение опасной инфекцией.

Важно! Особое внимание нужно уделить содержанию молодняка. После выкидышей необходимо провести дезинфекцию всех предметов. Стойло лучше всего сжечь. Пол и стены помещения обрабатывают хлорной известью.

Бактерии бруцеллеза проявляют высокую устойчивость во внешней среде. Заболевание передается не только через корм и воду. Возбудители проникают в организм коров через поврежденные слизистые во время контакта с больными особями. Чтобы предотвратить заражение опасной инфекцией, рекомендуется проводить вакцинацию всего стада.

источник

УТВЕРЖДЕНЫ

Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 30 декабря 1982 г. N 115-6a

1.1. Бруцеллез — инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.

Возбудитель — бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (козье-овечий), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), овис (бараний), канис (собачий) и неотома (кустарниковых крыс).

Микроорганизмы первых трех видов вызывают бруцеллез; бруцеллы вида овис — заболевание, называемое инфекционным эпидидимитом баранов (ИЭ).

От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.

1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологических, серологических и аллергических исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных.

1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:

различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных соответствующего вида, однако бруцеллы видов мелитензис и абортус могут мигрировать и на животных других видов;

клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее частое клиническое проявление болезни у маточного поголовья — аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов. При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или гнойных хлопьев. Бруцеллез нередко сопровождается поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок — эндометрит, вагинит, у самцов — орхит, эпидидимит);

патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей, позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно (так называемый «миллиарный бруцеллез матки»).

1.2.2. У баранов, больных инфекционным эпидидимитом, в семенниках и придатках обнаруживают воспалительно-некротические или гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной оболочкой, иногда атрофию семенника.

1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое и серологическое) исследования материала и аллергические исследования животных в хозяйствах.

Плановые серологические и аллергические исследования являются основными методами выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.

Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и проч.), вызывающих подозрение на данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих животных.

1.4. При отборе проб крови, молока и патологического материала, а также при проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями по данному вопросу.

2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.

2.2. На бактериологическое исследование на бруцеллез в лабораторию направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее 3 плодов) или желудок плода с содержимым (желудок перевязывают со стороны пищевода и со стороны двенадцатиперстной кишки), а также кусочки печени и селезенки.

При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70-градусным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70-градусным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10-15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.

У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70-градусным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1-процентного спиртово-водного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.1. Для исследования на инфекционный эпидидимит в лабораторию направляют: от баранов — семенники с придатками; от овцематок — абортированные плоды с плодовыми оболочками, выделения из половых путей, взятые в первые 5 дней после аборта.

2.2.2. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в тот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с патологическим материалом направляют кровь на серологическое исследование на бруцеллез.

Если в течение 24-30 часов взятый материал доставить в лабораторию не представляется возможным, его консервируют стерильным 30-процентным водным раствором химически чистого глицерина.

Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем в 4-5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.

2.3. На серологическое исследование в лабораторию направляют кровь (или сыворотку крови) и молоко.

2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней — из ушной или хвостовой, у лисиц и песцов — из бедренной вены, у норок — путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста) в стерильные пробирки по 5-7 мл (от пушных зверей по 1-2 мл). Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают 30-60 мин при 20-30 °С, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки выдерживают при 4-10 °С. Через 20-24 часа отстоявшуюся сыворотку сливают в сухие стерильные пробирки (лучше в пробирки Флоринского) и направляют на исследование в лабораторию в свежем или консервированном виде.

Консервирование сывороток проводят:

добавлением 0,05 мл (1 капля) 5-процентного раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при постоянном перемешивании;

сухой борной кислотой (2-4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка кристаллов;

путем однократного замораживания.

Неконсервированная сыворотка пригодна для исследования в течение 6 дней со дня взятия крови с сохранением ее при 4-8 °С.

Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 дней; замороженные сыворотки — в течение 3 дней после однократного оттаивания.

Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.

2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу (10-15 мл) цельного свежего молока берут из одного удоя от коровы (буйволицы) в стерильную пробирку. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.) после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

При направлении молока на исследование в лабораторию каждую пробу консервируют добавлением одной капли 10-процентного раствора формалина на 5-10 мл молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2-3 суток. Перед исследованием его необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.

При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции следует проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.

Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), страдающих маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко животных в первые 2 недели после родов.

2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ установленной формы.

3.1. Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и проч.), вызывающих подозрение на данное заболевание.

3.2. Бруцеллы обнаруживают тремя методами: бактериоскопией мазков из патологического материала, выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки биологической пробы на морских свинках.

3.3. Бактериоскопическое исследование.

Из доставленного на исследование патологического материала делают по 2 мазка из каждого объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка, жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек. Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки, жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.

Мазки, фиксированные на пламени, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шин (см. Приложение N 1, п.1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы — мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно кокко-бактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шин в красный цвет.

3.4. Бактериологическое исследование.

3.4.1. Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночно-глюкозно-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар или сывороточно-декстрозный агар (см. Приложение N 1, п.2).

Культивирование возбудителя инфекционного эпидидимита баранов (бруцелла овис) проводят на плотных или полужидких печеночно-сывороточном или печеночно-аминопептидном агарах, а также на сывороточно-декстрозном агаре (см. Приложение N 1, п.2).

3.4.2. Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии протирают тампонами, смоченными 5-процентным раствором фенола. Стерильными ножницами вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а содержимое желудка — в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.

Из печенки и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0х1,5х2,5 см, увлажняют их спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают. Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1-0,2 мл высевают на поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской пипеткой непосредственно из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.

Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10 пробирок агара.

При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тканей каждого плода отдельно.

Из плодовой оболочки, плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки без некротических изменений). Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и заливают 3-процентным раствором гидроокиси калия на 30 минут. Затем их обмывают стерильным физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5-процентного спиртового раствора на 100 мл среды) или кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски 1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 0,125 мг на 1 мл среды.

Содержимое бурс, гигром высевают на 3-4 чашки с плотной питательной средой, содержащей бактериостатические препараты.

Пробы молока центрифугируют 30 минут при 3000 оборотов в минуту. Верхний слой (сливки) и осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1-0,2 мл вносят на 3-4 чашки с агаром, содержащим бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом, высевают на среды без бактериостатических веществ.

3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37-38 °С.

При исследовании материала от крупного рогатого скота половину засеянных пробирок и чашек инкубируют в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10-15%), другую — в обычных атмосферных условиях.

Для выделения возбудителя инфекционного эпидидимита баранов (бруцелла овис) все посевы инкубируют в атмосфере, содержащей 10-15% углекислого газа.

Для создания атмосферы с повышенным содержанием углекислого газа засеянные пробирки заливают парафином или помещают в эксикатор (микроанаэростат).

Перед парафинированием пробирки закрывают горящими ватными пробками, пронося последние над пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки обрезают, а оставшуюся часть углубляют на 0,5-1 см внутрь пробирки и заливают расплавленным парафином.

Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:

Читайте также:  Актриса которая болела бруцеллезом

заполнения части объема углекислым газом из баллона или аппарата Киппа;

внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25-процентного раствора серной кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия и 0,35 мл концентрированной соляной кислоты на 1 л объема);

сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны занимать не более половины объема эксикатора.

Для определения концентрации углекислого газа в эксикаторе можно использовать химический метод (см. Приложение N 1, п.3).

3.4.4. Посевы выдерживают в термостате при 37-38 °С в течение 30 дней. Первый просмотр посевов проводят через 18-24 часа. Пробирки с агаром и бульоном, заросшие посторонней микрофлорой, отбраковывают.

В дальнейшем для обнаружения роста бруцелл посевы просматривают каждые 3-4 дня визуально, при необходимости через лупу или при малом увеличении микроскопа. При отсутствии роста часть поверхности агара орошают конденсационной жидкостью.

При значительном росте посторонней микрофлоры (80% и более засеянных пробирок) бактериологическое исследование прекращают.

При просмотре посевов обращают внимание на характер роста микробов. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем — сероватый. С возрастом колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.

В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное кольцо, возвышающееся над уровнем бульона, а в дальнейшем небольшой осадок на дне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.

При обнаружении роста на жидких средах и отсутствии характерного роста на агаре из каждой пробирки готовят мазки, которые окрашивают одним из специальных методов и делают пересев на чашку с плотной средой для выделения чистой культуры. Пересевы на чашках культивируют так же, как и высевы из патологического материала.

Выделенные культуры идентифицируют по тинкториальным (окраска мазков по Граму и одним из специальных методов), морфологическим, культуральным свойствам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой.

При постановке реакции агглютинации на обезжиренное предметное стекло наносят каплю бруцеллезной сыворотки в разведении 1:50 и каплю той же сыворотки в разведении 1:2 (для выявления слабоагглютинабельных культур). В каждую каплю сыворотки бактериологической петлей вносят агаровую культуру и тщательно растирают ее. Одновременно ставят контроль с негативной сывороткой в тех же разведениях.

При положительной реакции через 1-3 мин в капле позитивной сыворотки образуются хлопья или комочки, а сама жидкость просветляется, что особенно заметно при покачивании стекла. В контроле наблюдается равномерное помутнение без образования хлопьев.

При отрицательной реакции агглютинации с культурой из одной колонии дополнительно исследуют не менее трех-четырех подозрительных колоний.

Культуры, обладающие типичными для бруцелл морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами и дающие положительную реакцию агглютинации с позитивной сывороткой, относят к бруцеллам.

Первичные культуры возбудителя инфекционного эпидидимита баранов подвергают серологической идентификации. Для этого проводят гипериммунизацию двух кроликов массой 2-3 кг путем двукратного с интервалом 7-8 дней внутривенного введения им по 2 мл взвеси двухсуточной исследуемой культуры, содержащей 3-4 млрд. микробных клеток в 1 мл физиологического раствора. Через 10-12 дней после второго введения от кроликов получают сыворотку крови и исследуют ее в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с овисным антигеном.

Культура возбудителя инфекционного эпидидимита баранов вызывает образование антител в крови кроликов (положительная РДСК). Отрицательный результат РДСК с овисным антигеном означает, что изучаемая культура не относится к возбудителю инфекционного эпидидимита баранов.

3.5. Биологическое исследование.

3.5.1. Биологическое исследование проводят на морских свинках (не менее двух) массой 350-400 г, предварительно проверенных на бруцеллез исследованием сыворотки их крови в РА с отрицательным результатом в разведении 1:5.

3.5.2. Для постановки биологической пробы используют тот же материал, что и для бактериологического исследования.

Из органов и содержимого желудка абортированного плода готовят суспензию на стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:10 и вводят подкожно с внутренней стороны бедра морской свинке в дозе 1 мл.

Из плаценты и плодовых оболочек (предварительно обработанных тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, и подсушенных сухими стерильными тампонами) вырезают кусочки размером 0,5х0,5 см, фламбируют их на пламени горелки, растирают в ступке со стерильным песком и заливают физиологическим раствором в соотношении 1:10. Полученную суспензию вводят морской свинке в дозе 1 мл.

Содержимое гигром, бурс вводят морской свинке подкожно в дозе 0,2-0,3 мл. При этом необходимо учитывать возможность гибели животного от сопутствующей микрофлоры, особенно стрептококков.

Пробы молока центрифугируют 30 минут при 3000 об./мин. Морской свинке вводят подкожно 2-3 мл материала из верхнего слоя (сливки) и осадка молока после центрифугирования.

3.5.3. На 15-й, 25-й и 40-й дни после заражения у морских свинок берут кровь в количестве 1-2 мл из ушной вены путем надреза или из сердца — путем пункции и сыворотку крови исследуют в пробирочной РА в разведениях от 1:10 до 1:80.

При положительной реакции агглютинации (в разведении 1:10 и выше) морских свинок убивают, в случае необходимости получения культуры возбудителя материал от них исследуют бактериологически. Высевы делают пастеровскими пипетками в 1 пробирку бульона и 2 пробирки агара из паховых, парааортальных лимфатических узлов (правых и левых), селезенки (2 высева), печени и костного мозга. Посевы культивируют, как описано в подпунктах 3.4.3 и 3.4.4.

При отрицательной РА у морских свинок в указанные выше сроки биопробу считают отрицательной, подопытных животных убивают.

3.5.4. При выделении культуры бруцелл на питательных средах из исходного материала биологическое исследование по данной экспертизе прекращают, а ранее зараженных морских свинок убивают.

3.6. Результат исследования на бруцеллез считают положительным при выделении культуры возбудителя или при получении у морской свинки положительной РА в разведении сыворотки крови 1:10 и выше, если из исходного материала культура не выделена.

При положительных результатах бактериоскопии и отрицательных результатах бактериологического исследования и биопробы материал считают подозрительным на бруцеллез.

3.7. Сроки исследования:

бактериологического — до 1 месяца;

биологического — до 2 месяцев.

3.8. В районных и межрайонных ветеринарных лабораториях все выделенные культуры бруцелл после их идентификации подлежат уничтожению путем автоклавирования при 1,5 атмосферах в течение 1 часа.

3.9. При необходимости определения вида бруцелл, а также в целях дифференциации полевых штаммов от вакцинных выделенные от животных культуры направляют в республиканские, областные, зональные ветеринарные лаборатории или ветеринарные научно-исследовательские учреждения, в которых имеются лаборатории или отделы, занимающиеся изучением бруцеллеза животных и имеющие разрешение органов здравоохранения на работу с микроорганизмами второй группы.

4.1. Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных с помощью реакции агглютинации в пробирках (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба — РБП) и в молоке коров — кольцевой реакции (КР).

4.2. Постановка и учет результатов реакции агглютинации в пробирках (РА).

4.2.1. Реакцию агглютинации в пробирках с бруцеллезным антигеном применяют при диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей, собак, пушных зверей и животных других видов.

4.2.2. Компоненты реакции агглютинации:

испытуемые сыворотки крови (см. подпункт 2.3.1);

позитивная бруцеллезная сыворотка, изготовленная биопредприятием или полученная от больного бруцеллезом животного. На этикетке флакона с такими сыворотками указывают титры в РА и РСК и дату изготовления;

негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных), изготовленная биопредприятием или полученная в лаборатории;

антиген бруцеллезный единый для РА, РСК и РДСК (см. Приложение N 2, п.6);

раствор хлорида натрия. При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, собак, пушных зверей и морских свинок для разведения испытуемых сывороток и антигена используют фенолизированный (0,5-процентный) физиологический раствор хлорида натрия (0,85-процентный), при исследовании сывороток крови овец, коз, буйволов — 5-процентный и оленей — 10-процентный фенолизированный раствор хлорида натрия (см. Приложение N 2, п.1).

4.2.3. Постановка реакции агглютинации.

Реакцию агглютинации проводят в объеме 1 мл в четырех разведениях:

при исследовании сывороток крови овец, коз, буйволов, оленей и собак — 1:25, 1:50, 1:100 и 1:200;

крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов — 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400;

пушных зверей и морских свинок — 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в первых двух разведениях.

Разлив компонентов реакции проводят индивидуальными мерными пипетками или групповыми дозаторами Флоринского.

Для исследования каждой испытуемой сыворотки крови требуется 5 пробирок. В пробирках первого ряда делают основное разведение. Для этого сыворотку крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов берут в дозе 0,1 мл, вносят в пробирки и добавляют к ней 2,4 мл соответствующего раствора хлорида натрия, получают разведение сыворотки 1:25. Сыворотку крови овец, коз, буйволов, оленей и собак берут в дозе 0,2 мл и добавляют 2,3 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1:12,5), а сыворотку крови пушных зверей и морских свинок берут в дозе 0,3 мл и добавляют 1,2 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1:5). Таким образом делают основное разведение испытуемых сывороток в пробирках первого ряда штатива (по 10 проб в ряду).

После приготовления основного разведения сывороток в первом ряду в пробирки третьего, четвертого и пятого рядов вливают по 0,5 мл соответствующего раствора хлорида натрия. Затем из пробирок первого ряда при помощи группового дозатора Флоринского переносят в пробирки второго и третьего рядов по 0,5 мл основного разведения сывороток (1:25, 1:12,5 или 1:5). В пробирках третьего ряда сыворотки смешивают с раствором хлорида натрия, по 0,5 мл этого разбавления переносят в пробирки четвертого ряда и также из пробирок четвертого ряда — в пятый. Из пробирок пятого ряда по 0,5 мл жидкости удаляют. Таким образом делают последовательные двукратные разведения одновременно 10 сывороток.

После этого в каждую пробирку второго, третьего, четвертого и пятого рядов с разведенными сыворотками вносят при помощи группового дозатора Флоринского или другого дозирующего устройства по 0,5 мл антигена, предварительно разбавленного в соотношении 1:10 соответствующим раствором хлорида натрия. После добавления антигена разведение сывороток в каждой пробирке удваивается и в зависимости от вида исследуемых животных будет составлять соотношения: 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400; 1:25, 1:50, 1:100 и 1:200 или 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.

В пробирки первого ряда бруцеллезный антиген не вносят, и они служат контролем качества сыворотки. При наличии хлопьев, фибрина, эритроцитов и посторонних примесей результаты реакции агглютинации не учитывают.

При массовых исследованиях сыворотки разливают индивидуальной микропипеткой (с грушей) или групповыми дозаторами Флоринского в две пробирки в дозах 0,02 и 0,01 мл (сыворотки крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов) или 0,04 и 0,02 мл (при исследовании сывороток овец, коз, буйволов, оленей и собак). Затем в каждую пробирку добавляют по 1,0 мл антигена, разведенного соответствующим раствором хлорида натрия в соотношении 1:20. При этом разведения сывороток будут соответствовать соотношениям 1:50 и 1:100 или 1:25 и 1:50.

При постановке реакции агглютинации одновременно с испытуемыми сыворотками ставят контроли:

с негативной сывороткой в тех же разведениях, как с испытуемыми;

с позитивной бруцеллезной сывороткой в разведениях до ее предельного титра.

После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирками осторожно встряхивают и помещают в термостат при 37-38 °С на 16-20 часов, затем выдерживают при комнатной температуре в течение 1 часа, после чего проводят учет реакции.

4.2.4. Учет реакции агглютинации. Результаты реакции учитывают визуально и определяют в крестах по следующей схеме:

++++ (4 креста) — полное просветление жидкости, микробные тела антигена осели на дно пробирки в виде «зонтика», при легком встряхивании «зонтик» разбивается на хлопья и комочки, а жидкость остается прозрачной (100% агглютинации);

+++ (3 креста) — неполное просветление жидкости и хорошо выраженный «зонтик» (75% агглютинации);

++ (2 креста) — просветление жидкости, «зонтик» умеренно выражен (50% агглютинации);

+ (1 крест) — едва заметное просветление жидкости, «зонтик» выражен слабо, при встряхивании заметно небольшое количество хлопьев или комочков (25% агглютинации);

— (знак минус) — просветления жидкости и образования «зонтика» не наступило, на дне пробирки виден «пунктик» осевших микробов антигена, при легком встряхивании образуется равномерная взвесь.

За титр антител принимают последнее разведение сыворотки, в котором произошла агглютинация не менее чем на 2 креста (++), что соответствует количеству международных единиц (ME) антител в 1 мл сыворотки (например, сыворотка с конечным титром РА 1:100 содержит 100 ME, 1:200 — 200 ME и т.п.).

Для более объективной оценки результатов РА в крестах готовят стандарты мутности, соответствующие 0 (нулю), 25, 50 и 75% просветления жидкости.

В четыре пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл антигена, разведенного 1:10. Затем в том же порядке в три первые пробирки добавляют 3, 2 и 1 мл фенолизированного физиологического раствора. В четвертую пробирку раствор не добавляют. После встряхивания пробирок жидкость из каждой из них переносят по 0,5 мл в серологические пробирки и добавляют по 0,5 мл фенолизированного физиологического раствора. Полученные стандарты соответствуют 75, 50 и 25% просветления жидкости. В последней, четвертой пробирке просветление отсутствует. Стандарты мутности готовят каждый раз при постановке РА и выдерживают в термостате одновременно с основной реакцией.

Степень просветления в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют визуально путем сравнения со стандартами и результаты реакции выражают в крестах.

При массовых исследованиях сывороток в двух разведениях все сыворотки, давшие агглютинацию с оценкой не менее чем на 2 креста (++) в каком-либо из указанных разведений, исследуют повторно в четырех разведениях.

4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации.

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов начиная с разведения 1:100 (100 ME — международных единиц антител), коз, овец, буйволов, оленей и собак — с разведения 1:50 (50 ME), пушных зверей и морских свинок — с разведения 1:10 (10 ME) с оценкой не менее чем на 2 креста.

Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации только в разведении 1:50 (50 ME) с сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов и в разведении 1:25 (25 ME) с сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на 2 креста.

При получении сомнительного результата реакции сыворотку крови данного животного исследуют повторно через 3-4 недели.

На неблагополучных по бруцеллезу фермах животных, при исследовании которых будет получена дважды сомнительная РА, относят к положительно реагирующим.

В заключении лаборатории о результатах исследования должна быть сообщена диагностическая оценка каждой пробы (положительная, сомнительная, отрицательная) и конечное разведение (титр) сыворотки, в котором получен соответствующий результат, выраженное в международных единицах (например: конечный титр сыворотки крови крупного рогатого скота 1:100 с оценкой 2 креста или более — «положительная 100 ME»; конечный титр сыворотки 1:50 с оценкой 2 креста или более — «сомнительная 50 ME»).

Суммарные результаты исследования испытуемых сывороток, серию антигена, срок его годности, а также предельный титр позитивной сыворотки записывают в журнал серологических исследований.

4.3. Постановка и учет реакции связывания комплемента (РСК) и реакция длительного связывания комплемента на холоде (РДСК).

4.3.1. Реакцию связывания комплемента применяют при диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей, оленей, собак, пушных зверей и животных других видов.

Реакцию длительного связывания комплемента, как более чувствительную, применяют вместо РСК при исследовании на бруцеллез сывороток животных указанных видов, а также при диагностике инфекционного эпидидимита баранов.

4.3.2. Компоненты реакций и их подготовка к работе:

испытуемые сыворотки крови (см. подпункт 2.3.1);

позитивная бруцеллезная или овисная сыворотка, изготовленная на биофабрике или полученная от больного животного. На этикетках флаконов с сыворотками указывают титр в РСК (РДСК) и дату изготовления;

негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных), изготовленная на биофабрике или полученная в лаборатории.

Испытуемые и контрольные (позитивную и негативную) сыворотки инактивируют в водяной бане в день постановки реакции: для РСК — при 60-62 °С в течение 30 мин (сыворотки крови ослов и мулов — при 64-65 °С, буйволов — при 62-64 °С в течение 30 мин, свиней — при 60-62° в течение 50 мин); для РДСК сыворотки крови животных всех видов — при 63-64 °С в течение 30 мин;

антиген бруцеллезный единый для РА, РСК и РДСК или овисный для РДСК в рабочем титре, указанном предприятием, его изготовившим (см. Приложение N 2, п.6);

комплемент — сыворотка крови морской свинки (свежая, консервированная добавлением 4% борной кислоты или лиофильно высушенная). При использовании в качестве комплемента свежей или консервированной сыворотки и при получении каждой новой серии сухого комплемента проводят титрование его в гемолитической системе для определения активности (см. Приложение N 2, п.4).

Сухой биофабричный комплемент растворяют в физиологическом растворе, как указано на этикетке. Берут такое количество ампул (флаконов), в которых содержится необходимое для проведения всего опыта количество комплемента. Содержимое ампул (флаконов) сливают в одну пробирку, осторожно смешивают, берут 0,5 мл и разводят физиологическим раствором 1:20 для титрования. Остальное количество комплемента хранят в холодильнике при плюс 2-4 °С;

гемолитическая сыворотка (гемолизин) — для РСК в удвоенном титре, для РДСК — в утроенном. Титрование гемолизина проводят периодически один раз в 3 месяца и при использовании каждой новой серии (см. Приложение N 2, п.5);

эритроциты барана — 2,5-процентная от осадка взвесь эритроцитов в физиологическом растворе для РСК и 3-процентная для РДСК (см. Приложение N 2, п.3).

Для приготовления гемолитической системы соответствующую взвесь эритроцитов и гемолитическую сыворотку в рабочем разведении смешивают в равных объемах и выдерживают в термостате при 37 °С в течение 15-20 мин. При смешивании гемолизин вливают во взвесь эритроцитов;

физиологический раствор — 0,85-процентный раствор химически чистого хлорида натрия в дистиллированной воде рН=7,3-7,4 или физиологический раствор, содержащий ионы магния и кальция (см. Приложение N 2, п.2).

Рабочие разведения всех компонентов для РСК или РДСК готовят перед постановкой реакции и проверяют их на антикомплементарность и гемотоксичность по следующей схеме:

источник