Меню Рубрики

Лабораторная диагностика аденовирусной инфекции крс

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота (аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит телят) (adenoviridae infection)

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота (аденовирусная пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит телят) (adenoviridae infection) — остро протекающее заболевание молодняка сельскохозяйственных животных, характеризующееся поражением органов дыхания, пищеварения, лимфоидной ткани, конъюнктивитами. Крупный рогатый скот часто является носителем латентных аденовирусов, вызывающих бессимптомные инфекции.

Этиология. Возбудителем аденовирусной инфекции является ДНК-геномный вирус, принадлежащий к семейству Adenoviridae, роду Mastadenovirus. Вирусные частицы имеют форму икосаэдра, размер — от 73 до 87 нм, суперкапсида отсутствует. В настоящее время известно 32 типа аденовирусов человека, 25 типов — крупного рогатого скота, 4 типа — овец, по 2 типа аденовирусов собак и мышей, 8 типов кур.

Штаммы аденовирусов крупного рогатого скота 1-го, 2-го и 3-го серотипов имеют общий комплементсвязывающий антиген, отличающийся от антигена типов 4, 5, 6. На основании этих свойств аденовирусы к.р.с. делят на 2 антигенные подгруппы. Аденовирусы первой подгруппы более близки по биологическим свойствам к аденовирусам человека. Отдельные серотипы аденовирусов обладают онкогенными свойствами.

Аденовирусы в зависимости от серотипа вызывают гемагглютинацию эритроцитов белых крыс (1-й и 2-й серотипы), белых мышей (2-й серотип), обезьян.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях аденовирусной инфекцией чаще заражаются телята в возрасте от 2-недель до 4-мес., а также поросята, ягнята, цыплята, жеребята, щенята собак, лисиц, песцов. Установлена повышенная чувствительность к аденовирусной инфекции у жеребят арабских пород.

Источником возбудителя инфекции являются больные животные, выделяющие вирус с носовыми истечениями и фекалиями. Заражение происходит аэрогенным и алиментарным путями, через конъюнктиву глаз, при непосредственном контакте. Факторами передачи служат загрязненные выделениями больных животных, корм, вода, воздух, подстилка, инвентарь и др.

У взрослых животных аденовирусная инфекция протекает латентно, сопровождаясь длительным вирусоносительством. У молодняка болезнь проявляется спорадически или в виде энзоотических вспышек. У телят и поросят эта болезнь может перейти в опустошительную эпизоотию с острым течением, массовыми пневмониями, высокой летальностью. Отмечены случаи осложнений аденовирусной инфекции микоплазмами, бактериальной микрофлорой и другими вирусами.

Отмечена взаимосвязь течения аденовирусной инфекции крупного рогатого скота с лейкозом. При обследовании коров из неблагополучных по лейкозу хозяйств установлено, что серопозитивные коровы на 100% инфицированы аденовирусами.

Течение и симптомы. Инкубационный период у телят составляет 3-4 суток. Течение болезни у молодняка острое, в более старшем возрасте возможно и хроническое.

У телят устанавливают повышение температуры до 41,5°С, отказ от корма, вначале серозное, а затем слизисто-гнойное истечение из носа, слезотечение, кашель, затрудненное дыхание и понос.

Особенно тяжело болезнь протекает среди телят 15—20-суточного возраста, у которых выявляют понос с примесью крови и слизи, сильное угнетение, дегидратацию организма, гибель 50—60% больных за 1—3 суток болезни. У телят более старшего возраста отмечают кашель, поносы, истощение, отставание в росте и развитии.

Диагноз на аденовирусную инфекцию ставят комплексно на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических изменений и лабораторных исследований. Лабораторная диагностика на аденовирусную инфекцию включает в себя проведение следующих исследований: выявление специфического антигена из биологического материала с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) или иммунофлуоресценции (МФА), выделение вируса на культуре клеток и его идентификация в реакциях нейтрализации (РН) и торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА). Сюда же входит реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА), а также ретроспективная диагностика с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), иммуноферментного анализа (ИФА), нейтрализации (РН), связывания комплемента (РСК).

Дифференциальный диагноз. Аденовирусную инфекцию, дифференцируют от инфекционного ринотрахеита, респираторно-синтициальной инфекции, вирусной диареи, парагриппа-3, хламидиоза, пастереллеза.

Лечение. Для лечения используют гипериммунные сыворотки и сыворотки реконвалесцентов, в которых имеются антитела к аденовирусу одновременно с антибактериальными и иммуностимулирующими препаратами. Применяют также симптоматические методы лечения.

Профилактика и меры борьбы. Для специфической профилактики используют инактивированные моновакцины, гипериммунные сыворотки. Для ликвидации заболевания используют общие противоэпизоотические мероприятия – ограничение движения скота, дезинфекция, карантинирование больных животных.

Copyright © 2009
При использовании материалов сайта, ссылка —
Московский Ветеринарный WEB-Центр обязательна.

источник

Цель занятия: изучить методы диагностики парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.

Материалы и оборудование: диапозитивы, таблицы, рисунки. Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.

Диагноз при этих болезнях может быть установлен только с использованием всего комплекса исследований.

Парагрип п-3 — остропротекающая контагиозная болезнь. Возбудитель — вирус семейства Paramyxoviridae.

При установлении диагноза нужно учитывать эпизоотологические данные, симптомокомплекс и патологоанатомические изменения и в первую очередь результаты вирусологических и серологических исследований.

Согласно эпизоотологчческим данным болеют главным образом телята до 6-месячного возраста.

Основной клинический признак болезни — поражение органов дыхания.

Лабораторная диагностика основана на выделении возбудителя из носовых истечений больных животных и идентификации его с помощью реакции гемадсорбции и ее торможения в культуре клеток, реакции торможения гемагглютинации и выявления прироста специфических антител в парных сыворотках.

Инфекционный ринотрахеит — остропротекающая контагиозная болезнь, вызываемая вирусом семейства Herpesviridae.

У крупного рогатого скота известно пять форм клинического проявления инфекционного ринотрахеита: респираторная, глазная, менингоэнцефалитная, или нервная, генитальная и суставная. При попадании вируса в половые органы животного развивается пустулезный вульвовагинит, характерны аборты. У телят часто регистрируют пневмонию. Гибель плода в утробе матери и аборты отмечают через 3 нед после заражения.

Лабораторный диагноз основан на выделении и идентификации вируса в тканевой культуре почек, легких, тестикул бычков. Присутствие вируса инфекционного ринотрахеита в зараженных культурах клеток выявляют по цитопатическому действию (ЦПД) и идентифицируют с помощью РН.

Вирусная диарея (ВД)— острая контагиозная болезнь, вызываемая пестивирусом семейства Flaviviridae.

Согласно эпизоотологическим данным болеет крупный рогатый скот обычно в возрасте от 2 мес до 2 лет.

Клинические признаки болезни зависят от ее течения (острое, подострое, хроническое и латентное). При остром течении у животных резко повышается температура тела (40,5…42,4 °С), развивается угнетение. Одновременно отмечают гиперемию слизистых оболочек носовой полости, а затем слизистые истечения из носовых отверстий.

Для лабораторного исследования направляют кусочки слизистой оболочки носа, кишечника, внутренних органов и лимфатические узлы в термосе со льдом. Вирус выделяют на первичных культурах клеток тестикул быка, почки эмбриона коровы и титруют в РН на культуре клеток, в РИД, РСК, РИФ, РИА.

Аденовирусные инфекции—остропротекающие болезни животных многих видов (чаще болеет КРС). Поражается в основном молодняк, у взрослых животных болезнь протекает латентно. Возбудитель принадлежит к семейству Adenoviridae.

Клинические признаки у телят: лихорадка, снижение аппетита, слезотечение, слизисто-гнойное истечение из носа. Затем отмечают затрудненное дыхание, кашель, диарею с примесью крови. Летальность до 60 %. При переболевании телята долго отстают в развитии.

Диагноз устанавливают на основании лабораторных исследований — выделения вируса в культурах тканей и идентификации его в РСК, РИФ, РДП, РН, РНГА и результатов исследования парных сывороток в РНГА.

Учитывая возможность смешанной инфекции, параллельно исследуют материал бактериологическим методом. Дифференциальная диагностика вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота приведена в таблице 8.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Разработать схему дифференциальной диагностики инфекционного ринотрахеита и хламидиоза.

2. Решить эпизоотологическую задачу.

Комплекс по откорму молодняка крупного рогатого скота. Заболевание телят возникло через 1 сут после их перевозки в холодную дождливую погоду в открытых автомашинах. Болезнь характеризовалась быстрым распространением. В течение 10 дней заболело 80 % телят. При типичном течении болезни животные через 1…2 нед выздоравливали. У отдельных телят (10 %) болезнь приняла затяжное течение и тяжелую форму, при этом нередко оканчивалась смертью, особенно при поражении легких.

Клинические признаки болезни: температура тела 41… 42 «С;

Пульс 110…120 уд/мин; дыхание 60…84 дв/мин. Общее состояние угнетенное. Животные плохо поедают корм. Серозно-катаральный конъюнктивит, ринит. Серозное истечение из носовой полости. Сильный сухой кашель. У одних животных наблюдают слюнотечение, на слизистой оболочке ротовой полости эрозии, усиленную перистальтику, жидкие фекалии. У других—вначале серозный конъюнктивит и ринит, а затем слизисто-гнойное истечение из носовой полости, усиливающийся кашель, признаки бронхопневмонии.

Установить первоначальный диагноз.

Выбрать дополнительные методы диагностики, разработать схему дифференциального диагноза.

источник

Аденовирусная инфекция КРС (АВИ КРС, аденовирусная пневмония телят, аденовирус­ный пневмоэнтерит) у телят протекает остро и характеризуется поражением органов дыха­ния, пищеварения и конъюнктивитами. КРС часто является носителем латентных аденови­русов (АВ) КРС, вызывающих бессимптомные инфекции, патогенез и роль которых в общей патологии животных остается неясной. АВИ КРС регистрируется во многих странах мира.

Поставить диагноз на АВ по эпизоотологическим данным, клиническим и патологоанатомическим признакам нельзя, так как сходную патологию могут вызывать вирусы других таксономических групп: парагриппа-3, диареи, неориккетсии и др. Поэтому при постановке диагноза решающее значение имеют лабораторные исследования.

Лабораторная диагностика АВИ КРС заключается в следующем: обнаружение АГ в па­тологическом материале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных, в ИФ и РСК; выделение возбудителя в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его групповая идентификация в серологических реакциях: (РСК, РДП и РИФ); выявление АТ в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в серологических реакциях: (РСК, РИГА, РДП и ЕLISА).

Лабораторную диагностику АВИ проводят с использованием соответствующего набора диагностикумов, выпускаемого биологической промышленностью, и параллельно с исследо­ванием материала на ПГ-3,
РС-инфекцию, ИРТ и ВД-БС. Показана возможность тести­рования АВИ с помощью ДНК-зонда. Это, по существу, экспресс-метод лабораторной диагностики АВИ, который можно с успехом применять при массовом обследовании телят в хо­зяйствах промышленного типа. Наиболее четкую картину гибридизации наблюдали на 5-7-е сут в пробах смывов из носа. Это соответствует динамике накопления вируса в организме зараженных животных.

Серологическая идентификация.Идентификацию выделенных

шт. вируса проводят в ИФ, РСК и РДП. Ввиду того, что КС и преципитирующий АГ вирусов 1-й подгруппы (1, 2 и 3) отличны от АГ
2-й подгруппы (4, 5, 6 и др.), РИФ, РСК и РДП ставят с 2-мя антисыво­ротками, соответствующим 2 подгруппам. Препараты считаются положительными при на­личии флюоресценции в 10% клеток, заражённых патологическим материалом, при ее от­сутствии в контрольной (незараженной) культуре клеток. Срок выявления АВ в культуре клеток зависит от заражающей дозы и колеблется в пределах 20-96 ч. Показана возмож­ность применения сыворотки к гексону 1-го типа АВ человека для обнаружения АВ КРС. Близкое АГ родство АВ 1-й подгруппы КРС и человека может служить основанием для соз­дания на основе гексона единого диагностикума для ИФ-выявления данных АВ.

Исследование в данном методе антигексоновых сывороток к АВ позволяет повысить его эффективность в 3 раза в сравнении с использованием антисыворотки к цельному вирусу.

НИФ.Для экспресс-диагностики АВИ КРС в клинических образцах разработан вариант непрямой ИФ клеточных культур на покровных стеклах, зараженных АВ, с помощью монАТ с групповой специфичностью гексонов всех АВ млекопитающих.

РСК.С ее помощью можно успешно обнаруживать и идентифицировать выделенные полевые шт. АВ. РСК ставят по общепринятой методике в макро- или микровариантах. В качестве испытуемого АГ используют органы и ткани больных животных, а также культуральный вирус, полученный после заражения культуры клеток. Разработаны методики при­готовления АГ и схемы иммунизации для получения (1:1280) сывороток.

РДП.Ставят в чашках Петри в слое застывшего агара. Как и РСК, её используют для идентификации вновь выделенных шт. АВ с гипериммунными сыворотками кроликов (сыворотки морских свинок для этой цели не применяют). Шт. серотипов 1-й подгруппы (Воvine 10, Воvine -19, WBR 1) в РДП прекрасно реагируют между собой, тогда как шт. 2-ой подгруппы (ТНТ/62, В4/65 и 671/130) проявляют низкую активность в РДП даже с гомоло­гичными сыворотками. Однако, если использовать концентрированные АГ этих шт., с по­мощью РДП удается четко выявить перекрестную АГ- связь между ними. В качестве ис­пытуемого АГ используют культуральную вируссодержащую жидкость, которую необходи­мо концентрировать.

РТНГА.Рекомендуют для идентификации выделенного в культуре клеток вируса. При положительных реакциях РСК и РДП устанавливают принадлежность АВ к 1-й или 2-й под­группе АВ КРС и проводят его типирование с типоспецифическими сыворотками к АВ КРС. Типирование бычьих АВ осуществляют в научно-исследовательских учреждениях, имею­щих типоспецифические сыворотки и вирусы для РН.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика.Необходимо иметь в виду, что при положительном результате выделения и идентификации АВИ для окончательной поста­новки диагноза необходимо исследовать парные сыворотки больного животного с выделен­ным вирусом. Если при помощи РИГА и РСК выявлено 4-кратное и более повышение титра АТ к выделенному вирусу во 2-й сыворотке больного по сравнению с 1-й, ставят диагноз. В реакциях используют парные пробы сывороток, взятые в первые 2-3 сут болезни и через 14-30 дн. У заболевших животных вначале выявляются АТ в РИГА, затем — в РН и РТГА и уже через 1-1,5 нед — в РДП и РСК. КС и ПА сохраняются у животных-реконвалесцентов до 4 мес. У экспериментально заражённых телят ВНА обнаруживают на 5-й дн после заражения в титре 2,2 log2 и на 10-й дн — в титре 4-4,3 log2.

Читайте также:  Аденовирусная инфекция антитела

ЕLISА.Установлена в 100 раз большая его чувствительность для выявления АТ к гек-соновому АГ АВ по сравнению с РСК Были получены гипериммунные, высокоактивные и специфические сыворотки против гексонов АВ 1-й подгруппы (ВАV1 и ВАV3) и 2-й под­группы (ВАV7), которые были рекомендованы при разработке иммуноферментного набора для серодиагностики АВИ КРС. Для диагностики АВИ биопромышленность выпускает 2 диагностических набора для выявления и идентификации вируса и АТ методами ИФ, РСК, РДП и РНГА.

Дифференциальная диагностика.Клинико-эпизоотологическая диагностика АВИ за­труднена из-за сходства её с ПГ-3, ВД-БС, ИРТ,
РС-инфекцией, хламидиозом и другими бо­лезнями, поражающими респираторно-кишечный тракт животных. Кроме того АВИ часто протекает в ассоциации с вышеуказанными болезнями. Поэтому только лабораторные ис­следования, проводимые с использованием диагностических наборов к указанным болезням, помогут правильно поставить диагноз.

источник

Вирусоскопия.ЭМ и ИЭМ в практических условиях не применяются. Из экспресс-методов диагностики наибольшего внимания заслуживает применение гибридизационного зонда. С помощью его (точечной гибридизации) удается дифференцировать два родствен­ных морбилливируса — ВЧ КРС и ВЧ МЖЖ. Дифференциальная диагностика с помо­щью ДНК-зондов помогла идентифицировать вспышку чумы КРС среди популяции баранов в Индии.

Индикация и идентификация вируса

Обнаружение специфических телец-включений.В зараженных культурах клеток в цитоплазме одиночных клеток и симпластов появляются сначала мелкие эозинофильные включения округлой формы со светлым ободком вокруг. С увеличением размеров симпла­стов растут объем и число цитоплазматических включений. Последние принимают много­угольную, продолговатую формы или форму кольца, охватывающего ядра симпластов; в ци­топлазме располагается до 10 включений. Вслед за появлением цитоплазматических включений в инфицированных клетках, в том числе и в симпластах, образуются внутриядерные оксифильные включения в количестве 2-4. Хроматиновая сеть ядра нарушается лишь вокруг включений. В некоторых случаях они занимают почти все ядро.

Биопроба.Идентифицировать ВЧ можно биопробой на иммунном и неиммунном скоте. Двух животных вакцинируют сухой вирусвакциной из шт. ЛТ (согласно утвержденному на­ставлению по применению препарата). Через 12 дн вакцинированных и двух невакцинированных животных заражают испытуемым материалом (суспензия селезенки, лимфоузлов и крови). При наличии у невакцинированных животных специфической температурной реак­ции, клинических признаков и отсутствии таковых у иммунных животных биопроба счита­ется положительной. У заболевших или павших животных обнаруживают специфический АГ в РСК и РДП.

РН. Применяют качественную и количественную РН. Для установления специфичности вызываемых вирусом поражений клеток проводят качественную РН, а для определения ко­личества АТ в сыворотке иммунных животных — количественную.

РСК.Применяют для прижизненной и посмертной диагностики чумы с целью выявле­ния АГ в гомогенатах лимфоузлов, селезенки, а также в инфицированной культуре клеток. При использовании РСК с целью идентификации вируса в культуре клеток в качестве спе­цифического и контрольного АГ используют культуральную жидкость с зараженной и неза-раженной культурами клеток.

Предложена упрощенная модификация РСК для определения растворимых АГ ВЧ КРС. АГ готовят из лимфоузлов или селезенки КРС, коз и кроликов. Отмечено, что АГ, подверг­нутые замораживанию — оттаиванию или ультразвуковой обработке, или осаждению сульфа­том аммония или сульфатом натрия, более активны.

Гипериммунные сыворотки для идентификации вируса готовят по методу Скотта. Кровь берут от кроликов, иммунизированных лапинизированиым, авинизированным или ЛТ-вирусами. Такие сыворотки нужны для обнаружения испытуемого АГ в РСК. Положитель­ные сыворотки и соответствующие им контроли (нормальные сыворотки) получают на КРС в возрасте 12-18 мес. От них берут сыворотку до иммунизации (контрольная) и через 21 день после подкожной прививки 100 иммунизирующих доз (позитивная сыворотка). Такая сыворотка обычно в РН реагирует положительно в разведении 1:40 — 1:80. Полученную сы­воротку сохраняют при -20°С и используют в РСК и РН с испытуемым АГ в течение 4-
6 мес. Диагностическую сыворотку для РСК получают также от кроликов, инфицированных, а затем гипериммунизированных ВЧ КРС.

РДП.Реакцию ставят по методу Оухтерлони. Выявление преципитирующего АГ ВЧ в органах больного КРС является ценным диагностическим тестом, поскольку этот АГ регу­лярно появляется в лимфоузлах больных животных, начиная с 1-го дня повышения темпе­ратуры. На 3-й день болезни он выявляется лишь у 50% больных. РДП, как и РСК, дает бы­стрый ответ (через 12-18 ч). Оптимальный срок для взятия проб — период от 4-6 дн после начала лихорадки до появления поражений во рту и диареи. Если нет животного в этой ста­дии болезни, рекомендуют брать образцы от погибшего животного. Для исследования при­годен материал даже от разлагающихся в течение 52 ч трупов, в качестве антител исполь­зуют гипериммунные сыворотки кроликов и КРС.

Заведомо положительные и отрицательные АГ, приготовленные соответственно от больных и здоровых животных, используют в РДП одновременно. Положительную преципитирующую сыворотку получают от кроликов, иммунизированных инфицированными кро­личьими тканями. РСК, РДП, РН и РИГА являются специфичными и эффективными лабо­раторными методами выявления АГ и идентификации ВЧ КРС. Однако данные ученых показали, что аттенуированные штаммы ВЧ КРС в естественных условиях не сти­мулируют продуцирование преципитирующего антигена в тканях животных. Это может быть характерным признаком отличия вакцинного штамма от эпизоотического. В Иране в 1982 г. в зонах, где скот был вакцинирован, у привитых животных не обнаруживали образо­вание преципитирующего антигена. Поэтому в зонах систематической вакцинации скота против данной инфекции диагноз поставить сложно.

ВИЭОФ.Предложен вместо РДП для быстрой диагностики чумы КРС. В качестве ис­пытуемого АГ служит суспензия селезенки и лимфоузлов толстого кишечника КРС и овец, полученных во время вспышки болезни. ВИЭОФ проводят в 0,8%-ной агарозе на вероналовом буферном растворе с рН 8,6. Гипериммунную сыворотку помещают в лунки вблизи анода, исследуемый материал — вблизи катода. Пластины помещают в горизонтальную ван­ночку с охлажденным вероналовым буфером. Линии преципитации образуются через 45 мин при силе тока 6 мА. ВИЭОФ при обнаружении АГ в тканях павших животных он ока­зался в 4-16 раз чувствительнее РДП и позволяет получить результат в течение 40 мин.

РТГА.Разработана для экспресс-диагностики чумы КРС. Если исследуемый материал содержит вирус, анти-ГА связываются, а их отсутствие или нехватку можно потом выявить, исследуя сыворотку в РТГА с использованием гемагглютинина ВК. При отсутствии вируса в исследуемом материале количество АТ остается неизменным. В этой реакции используют родство АГ ВЧ КРС и ВК. Особую ценность она имеет для диагностики случаев заболева­ния, вызванных штаммами с ослабленной вирулентностью.

ИФ.В качестве исследуемого материала используют мазки-отпечатки и гистологиче­ские срезы (селезенка, лимфоузлы, печень, слизистые оболочки ротовой полости и кишеч­ника) из органов и тканей больных животных или инфицированные этими материалами культуры клеток. Возможно применение непрямого ИФ для обнаружения специфического АГ. Четкие результаты получают в случаях, если ФИТЦ-конъюгат изготовлен на основе гамма-глобулина, выделенного ионообменной хроматографией из специфической сыворот­ки. Прямая ИФ позволяет обнаруживать АГ в более ранние сроки: в мазках-отпечатках из органов больных животных через 2 ч, в зараженной культуре клеток — на 1 пассаж ранее по­явления ЦПД — т.е. раньше на 8-10 дн. С помощью прямой ИФ возможно оценивать результаты РН в культуре клеток через 24-48 ч после постановки опыта, тогда как для оцен­ки реакции по ЦПД вируса требуется 6-8 сут. Поэтому прямой метод ИФ признан высоко­специфичным, чувствительным и пригодным для экспресс-диагностики чумы КРС.

РНГАи РЗГА.Обе реакции позволяют дифференцировать сыворотки и АГ при исполь­зовании обработанных дубильной кислотой эритроцитов крови коз. Реакции основаны на адсорбции перекрестных АТ из сыворотки, которая используется в РТГА.

ИФА.ИФА позволяет быстро выявлять АГ ВЧ КРС в патматериале. Наиболее часто АГ выявляли в мазках из поражений слизистой ротовой полости и лимфоузлов. АГ ВЧ наибо­лее часто выявляли у КРС моложе
3 лет, а у буйволов — в более старшем возрасте. В РДП и ИФА результаты совпадали, но последний позволял получить результат через 2-3 ч. Успеш­но вирус определяли в назальных и глазных секретах через 4 дн несмотря на то, что он там содержался в количестве не более 1,75lg
ТЦД50/МЛ. ИФА оказался более чувствительным по сравнению с выделением ВЧ КРС. Получены компоненты набора для диагностики чу­мы КРС методом твердофазного ИФА, которые обеспечивают обнаружение вирусспецифического АГ (нуклеопротеина) ВЧ КРС в лизатах зараженных клеточных культур и пробах органов больных животных, а также обеспечивали обнаружение АТ в сыворотках больных и переболевших животных. Чувствительность ТФ ИФА при выявлении специфических анти­тел в сыворотках крови больных и иммунных животных (метод ингибирования) сравнима с чувствительностью РТНГА с использованием эритроцитарного диагностикума на основе монАТ к ВЧ КРС.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Для обнаружения АТ используют РН, ВИЭОФ, РРГ и ЕLIЗА. Для серологического исследования берут кровь как можно раньше после установления клинических проявлений и повторно через 10-14 дн. Исследуют парные сыворотки крови не менее чем от 10 животных. ВНА и КСА у животных-реконвалесцентов обнаруживаются через 3-5 дн, поэтому чаще всего применяют РСК и РН. Ретроспективную диагностику чумы КРС проводят в очагах инфекции или при атипичном её течении на вакцинированном поголовье животных, имевших слабый поствакцинальный иммунитет. 4-кратное увеличение титра КСА и ВНА свидетельствует о наличии прошедшей инфекции.

РСК.Применяют чаще всего. На 3-4-й день после снижения температуры у животных обнаруживают КСА в титре от 1:10 до 1:40. На 21-30-й дн достигают максимума и удержи­ваются в течение 3 мес на уровне 1:80-1:160. Через 8 мес титр их составляет 1:20-1:40.

РН. Можно ставить на кроликах, имея лапинизированный штамм. Учитывая дорого­визну этого метода, его используют крайне редко. Реакция в культурах клеток с использова­нием адаптированных к ним штаммов — метод более простой и дешевый. Для выявления и титрования ВНА метод микротитрования не уступает пробирочному, но выгодно отличается от него меньшей чувствительностью к колебаниям дозы. Чтобы избежать цитотоксического и ингибирующего проявления, рекомендуется делать первоначальное разведение сыворотки 1:5. Количественную РН можно проводить в двух вариантах: 1) с постоянной дозой вируса (200-500 ТЦД50) и двукратно возрастающими разведениями сыворотки;
2) с постоянной до­зой сыворотки (разведение 1:5-1:10) и 10-кратными разведениями вируса 10 -1 -10 -6 .

РТГА.В качестве АГ в этой реакции используют вирус кори.

ЕLISА.Непрямой твердофазный микрометод позволяет обнаруживать АТ к ВЧ КРС. Данные его коррелируют с результатами РН. Считают, что указанный метод можно успешно применять для оценки эпизоотической ситуации и при проведении кампаний по вакцинации животных.

Проведена сравнительная оценка эффективности использования ИФ, ИФА и ВИЭОФ для выявления АТ против чумы КРС у телят, вакцинированных культуральной вирус-вакциной против чумы КРС. Исследования проведены с использованием первичных куль­тур бычьей почки, выращенных на покровных стеклах и инфицированных шт. К90 ВЧ КРС, или с использованием мазков-отпечатков ткани лимфоузлов КРС, зараженного шт. Гиссар. При применении ИФА мазки-отпечатки предварительно обрабатывали антипероксидазной сывороткой для удаления эндогенной пероксидазной активности клеток лимфоузлов. Уста­новлено, что в первые 7 нед после вакцинации у телят удавалось выявить АТ в 100% случа­ев всеми испытуемыми методами. В последующий период (с 8 до 12 нед после вакцинации) наиболее эффективным был метод ИФ (АТ выявлены у 84,6-100% телят). Менее чувстви­тельными в этот период были методы ИФА и ВИЭОФ (соответственно АТ обнаружены у 23-77,7 и 7,7-77,7% телят). Для определения АТ к ВЧ КРС в Индии успешно применяют ме­тод micrоЕLISА. Показаны преимущества конкурентного ЕЫЗА со специфическими монАТ над непрямым ЕLISА.

Реакция радиального гемолиза (РРГ).Рекомендована для обнаружения АТ к ВЧ КРС. В качестве АГ используют суспензию лимфоузлов от зараженных телят. Реакцию ста­вят на пластинках, куда вносят 2-4 мл 1%-ной агарозы с 0,3 мл конъюгированных с АГ ба­раньих эритроцитов, обработанных хлоридом хрома и 0,3 мл неразведенного комплемента.

Дифференциальная диагностика.Проводится по данным исследования вируссодержащего материала (гибридизационным тестом, биопробой, серологическими реакциями с видоспецифической сывороткой). В связи с тем, что в некоторых странах, в том числе и в европейских, чума КРС давно ликвидирована, при случайном заносе она может быть оши­бочно диагностирована как вирусная диарея или злокачественная катаральная горячка, что необходимо иметь в виду при дифференциальной диагностике чумы.

Читайте также:  Аденовирусная инфекция без конъюнктивита

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

3. БОЛЕЗНИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

ВИРУСНЫЕ РЕСПИРАТОРНО-КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ

3.5. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНО-КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

РЕКОМЕНДОВАНЫ 25 июля 1978 г., б/н

1.1. Настоящие Методические указания распространяются на следующие вирусные респираторно-кишечные инфекции (пневмоэнтериты) крупного рогатого скота: инфекционный ринотрахеит (ИРТ), парагрипп-3 (ПГ-3), вирусную диарею (ВД), аденовирусную инфекцию (адено), респираторно-синцитиальную инфекцию (PC), грипп.

1.2. Лабораторная диагностика вирусных респираторно-кишечных инфекций заключается в:

— обнаружении антигена в патологическом материале методами иммунофлуоресценции (ИФ), реакции связывания комплемента (РСК), реакции диффузионной преципитации (РДП);

— выделении возбудителя из патологического материала в культуре клеток или на куриных эмбрионах и его идентификации в одной из серологических реакций: РСК, РДП, реакции торможения гемагглютинации (РТГА), реакции торможения гемадсорбции, (РТГАд), реакции нейтрализации (РН), реакции торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА), ИФ;

— выявлении антител в крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в одной из серологических реакций: реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), РДП, РН, РТГА, РСК, реакции нейтрализации вирусных гемагглютининов (РНВГ).

1.3. Схема исследований при лабораторной диагностике вирусных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота (см. стр.209, 210).

1.4. При лабораторной диагностике вирусных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота используют соответствующие каждой инфекции диагностические наборы, выпускаемые биологической промышленностью.

1.5. Диагностика вирусных пневмоэнтеритов проводится параллельно с исследованием материала на бактериальные и хламидийную инфекции.

1.6. Лабораторный диагноз на вирусные респираторно-кишечные инфекции ставится на основании положительных результатов обнаружения антигена в патологическом материале с помощью одной из серологических реакций (ИФ, РДП, РСК) или выделения и идентификации возбудителя в одной из реакций, указанных в схеме п.1.3, или установления четырехкратного прироста антител в крови переболевших животных.

Идентификация вируса (реакция)

Ретроспек-
тивная диагностика

исследуемый патологический материал

Слизистая носа, трахеи, легкие, головной мозг, органы абортированного плода

Слизистая носа, трахеи, легкие, селезенка

Слизистая носа, кишечника, преджелудков, трахеи, легкие, почка

Респираторно-
синцитиальная инфекция

Слизистая носа, трахеи, легкие

Обозначения: ПЭК — почка эмбриона коров; ПТ — почка телят; ТБ — тестикулы бычков; СЭК — селезенка эмбриона коров; ЛЭК — легкие эмбриона коров.

Диагноз на вирусные пневмоэнтериты считают установленным по результатам лабораторного исследования с учетом эпизоотологических и клинических данных и патологоанатомических изменений.

1.7. Для постановки лабораторного диагноза путем обнаружения антигена в патологическом материале требуется 2. 3 дня, с помощью выделения вируса и его идентификации — до 30 дней, а путем выявления прироста антител в крови животных — от 2 до 4 недель.

2.1. В лабораторию для исследования направляют патологический материал от больных животных, взятый в период максимального проявления у них клинических признаков (температурная реакция, угнетение, воспалительные процессы в верхних дыхательных путях, сопровождающиеся серозными или слизистыми истечениями из носовой полости, поносы, иногда аборты), или от вынужденно убитых или павших животных, взятый не позднее чем через 2 ч после их гибели.

2.2. От больных животных берут: 1) тампонами мазки со слизистой носовой полости (при ИРТ — со слизистой глаз, влагалища, препуция) для реакции иммунофлуоресценции и для выделения возбудителя; 2) фекалии — для выделения возбудителя и 3) пробы крови — для выявления в ней титра антител.

Тампоны с материалом помещают в пенициллиновые флаконы с 2…5 мл питательной среды для культуры клеток или раствора Хенкса, содержащие 1000 ЕД/мл пенициллина и 1000 мкг/мл стрептомицина.

Кровь в объеме не менее 5,0 мл берут в пробирки, после свертывания доставляют в лабораторию.

2.3. От павших и вынужденно убитых животных берут кусочки носовой перегородки, трахеи, легких, селезенки, почки, средостенные и брыжеечные лимфатические узлы и при поносах — кусочки тонкого отдела кишечника. От абортированных плодов берут кусочки паренхиматозных органов, околоплодную жидкость.

2.4. Флаконы с патологическим материалом доставляют в лабораторию в термосе со льдом.

2.5. В лаборатории флаконы с тампонами встряхивают 2. 3 мин, тампоны отжимают и удаляют, а содержимое флакона центрифугируют при 2 тыс. об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку, куда вносят по 500 ЕД/мл пенициллина и 500 мкг/мл стрептомицина, выдерживают при 4°С в течение 2. 4 ч и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов. Из осадка центрифугата готовят мазки для исследования методом иммунофлуоресценции.

2.6. Флаконы с фекалиями замораживают при температуре -20°С (в морозилке холодильника) в течение 18 ч, после чего оттаивают при 37°С и центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку, вносят 1000 ЕД/мл пенициллина, 1000 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина, выдерживают при 4°С в течение 2. 4 ч, дополнительно центрифугируют и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов.

2.7. Со слизистой носовой перегородки, трахеи, влагалища, бронхов и кишечника делают скальпелем соскобы, вносят их в центрифужную пробирку с 5 мл физиологического раствора и центрифугируют при 2 тыс. об/мин в течение 10 мин. Осадок клеток суспендируют в 0,5 мл того же раствора и готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах для исследования методом иммунофлуоресценции.

Из кусочков легкого и лимфатических узлов готовят отпечатки на предметных стеклах или срезы толщиной 5 микрон для исследования тем же методом.

2.8. Из кусочков органов готовят 10. 20%-ную суспензию для выделения возбудителя и приготовления комплементсвязывающего и преципитирующего антигенов.

2.9. Для получения суспензии (с целью выделения вируса) ткань измельчают, растирают в ступке со стеклянным песком, разводят раствором Хенкса, содержащим антибиотики, центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, выдерживают при температуре 4°С в течение 2. 4 ч и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов.

2.10. Для изготовления испытуемого комплементсвязывающего антигена ткань измельчают в ступке или специальном микроизмельчителе, разводят 1:5 содержащим антибиотики физиологическим раствором, рН 7,2. 7,4. Полученную 20%-ную суспензию замораживают при температуре -20°С в течение 16. 18 ч, быстро оттаивают при температуре 37°С, повторно растирают или гомогенизируют, а затем центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают и далее используют, как указано в п.5.1.

3.1. Метод иммунофлуоресценции для обнаружения вируса применяется при диагностике всех респираторно-кишечных инфекций, указанных в п.1.1.

3.2. Полученные мазки, отпечатки и срезы подсушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в течение 5 мин и окрашивают флуоресцирующими сыворотками, имеющимися в наборах диагностикумов. Каждой сывороткой окрашивают по 4 препарата из каждого органа.

3.3. Окрашивание препаратов ведут во влажной камере при температуре 37°С в течение 45 мин. Затем препараты споласкивают в трех сменах физиологического раствора, рН 7,2. 7,4, и в дистиллированной воде, подсушивают на воздухе. На препараты наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют их под люминесцентным микроскопом.

3.4. Для контроля специфичности свечения ставят реакцию подавления иммунофлуоресценции. Для этого на два препарата из органа, при исследовании которого получена положительная реакция иммунофлуоресценции, наносят соответствующую выявленному вирусу сыворотку в разведении 1:10 и выдерживают их в термостате во влажной камере в течение 30 мин.

Препараты споласкивают в трех сменах физиологического раствора, рН 7,2. 7,4, и окрашивают флуоресцирующей сывороткой.

3.5. Учет реакции. Положительным результатом исследования методом ИФ считается наличие специфической флуоресценции, которая характеризуется тем, что в препаратах, окрашенных флуоресцирующей сывороткой, ткань флуоресцирует тусклым зеленовато-серым цветом, а вирусный антиген при этом выявляется в виде ярких зеленовато-желтых различных по величине гранул или в виде диффузного свечения в цитоплазме или (при ИРТ, адено) в ядре.

В контрольных препаратах, обработанных последовательно специфической и флуоресцирующей сыворотками, специфическая флуоресценция должна отсутствовать.

Диагноз на вирусную респираторно-кишечную инфекцию ставят при обнаружении специфической флуоресценции не менее чем в трех полях зрения при наличии в каждом из них 3. 5 и более флуоресцирующих клеток или при наличии 15. 20% флуоресцирующих клеток при подсчете не менее 100 клеток в препарате. При выявлении меньшего числа флуоресцирующих клеток диагноз подтверждают исследованием антител в парных пробах сывороток крови больных животных или выделением возбудителя.

3.6. При исследовании материала от животных, привитых живыми вакцинами против инфекций, на которые проводятся диагностические исследования, положительные результаты ИФ во всех случаях следует подтверждать исследованием парных проб сывороток крови.

4.1. РДП ставят в агаровом геле.

4.2. Компоненты реакции: специфическая преципитирующая сыворотка; контрольная отрицательная сыворотка; исследуемый материал от больных животных; специфический антиген.

4.3. Агаровую среду готовят по прописи: агар — 1,0, физиологический раствор рН 7,4 — 100,0 мл. Агар расплавляют на водяной бане и разливают в чашки Петри по 25 мл или на обезжиренные предметные стекла. В слое застывшего агара при помощи штампа нарезают лунки — одну центральную и 6 вокруг нее на расстоянии 0,5. 0,7 см.

4.4. Постановка реакции. В центральную лунку вносят специфическую сыворотку, в лунки по окружности — испытуемый материал. Параллельно испытуемый материал исследуют с отрицательной сывороткой.

Контроли:

1) контрольный положительный антиген + специфическая сыворотка;

2) контрольный положительный антиген + отрицательная сыворотка.

Чашки Петри или предметные стекла помещают во влажную камеру, выдерживают при температуре 37°С в течение 18. 24 ч и затем при комнатной температуре в течение такого же времени.

4.5. Учет реакции. Реакцию считают положительной при условии образования ясно выраженной линии преципитации между лунками с исследуемым антигеном и специфической сывороткой, а также между контрольным положительным антигеном и специфической сывороткой при отрицательном результате с отрицательной сывороткой.

5.1. Комплементсвязывающий антиген готовят из 20%-ной суспензии патологического материала, обработанной, как указано в п.2.10. Для этого к ней добавляют 1%-ный раствор гексаметафосфата натрия до конечной концентрации 0,05% и раствор 1 н. НСl для снижения рН до 4,1.

Смесь оставляют на 30 мин, а затем центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок растворяют в 1/20 первоначального объема суспензии 0,1 М (моль/л) фосфатно-буферного раствора, рН 7,9, содержащего 0,85% хлористого натрия. Полученный раствор осветляют центрифугированием при том же режиме и исследуют в РСК с иммунными сыворотками к аденовирусу крупного рогатого скота.

5.2. Компоненты реакции: испытуемый антиген; два стандартных специфических антигена, относящиеся к двум антигенным подгруппам; отрицательный антиген; две специфических сыворотки, соответствующие антигенным подгруппам; нормальная сыворотка.

5.3. Испытуемый антиген исследуют в двукратных разведениях, остальные антигены и сыворотки — в удвоенном титре.

5.4. Постановка реакции. Реакцию ставят в пробирках в объеме 0,5 мл или используют микротитратор Такачи. РСК проводят в три этапа: титрование комплемента в чистом виде, титрование комплемента в присутствии антигенов и сывороток, главный опыт.

5.5. Для титрования комплемента во вспомогательном ряду пробирок готовят различные дозы по следующей схеме:

источник

Возбудитель относится к семейству AdenoviridaeДНК-содержащих вирусов, которое включает аденовирусы человека, животных, в том числе птиц, и состоит из двух родов: Mastadenovirus — аденовирусы млекопитающих и Aviadenovirus — аденовирусы птиц [1].

Вирус впервые был выделен в 1954 г., в США. Впервые аденовирусы у животных, в частности, у свиней выделил и описал в 1950 г. американский ученый Олсен. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота была установлена Клейном в 1959 г. В последующие годы аденовирусная инфекция была установлена у лошадей, овец, птиц. В настоящее время инфекция зарегистрирована во многих странах мира: Италии, Польше, Великобритании, ФРГ, Канаде, Молдове, Беларуси, на Украине.

Инфекцией чаще болеют телята от 2-недельного до 4-месячного возраста. Болезнь регистрируют в зимне-весенние месяцы при комплектовании хозяйств. Аденовирусная инфекция чаще проявляется небольшими вспышками, поражая отдельные группы животных, быстро распространяется на все стадо.

Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с истечениями из носа и фекалиями.Факторы передачи возбудителя — корма, вода, подстилка, предметы ухода, загрязненные выделениями больных животных. Заражение происходит воздушно-капельным и алиментарным путями, а также через конъюнктиву. Заболеваемость телят составляет 50-80 %, летальность — 15-60 % [4].

Инкубационный период длится 4-7 дней. Течение болезни зависит от условий содержания животных. Сначала появляются слезотечение и слизистые носовые истечения, которые в течение 3-5 дней переходят в гнойные. У телят снижается аппетит, учащаются пульс и дыхание, сухой кашель.Со 2-3-х суток заболевания у телят развиваются тимпания и диарея. На 3-4-й день повышается температура тела до 41,5 °С и удерживается до 9 дней. Диарея длится несколько дней. Фекальные массы жидкие, серо-коричневого цвета с примесью кусочков слизистой оболочки, иногда с кровью. Возможны колики. Летальность составляет 40-60 % [2].

Читайте также:  Аденовирусная инфекция аспирин

Диагноз ставят комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Биологическая промышленность выпускает набор для диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.

Для лабораторной диагностики используют: РИФ, РСК, РНГА, РТГА, РДП. Также выделяют возбудителя в культуре ткани тестикул бычка, почки эмбриона коровы или легких эмбриона коровы [3].

У переболевших животных иммунитет сохраняется до 5 мес. Иммуногенные животные остаются вирусоносителями, и при различных стрессовых воздействиях и обработке гормональными препаратами становятся источником возбудителя аденовирусной инфекции и могут заболеть повторно смешанной респираторно-кишечной инфекцией.

Лечение аденовирусной инфекции как таковое не разработано. Лечение проводится симптоматически.В основе профилактики болезни лежит соблюдение системы ветеринарно-санитарных мероприятий. С целью повышения устойчивости телят рекомендуется облучать их ультрафиолетовыми лучами в течение 7-10 дней.

Для активной иммунизации молодняка и стельных коров применяют инактивированную и живую бивалентную вакцины против аденовирусной инфекции и парагриппа, а также вакцины в других ассоциациях с антигенами инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, реовирусной и хламидийной инфекций крупного рогатого скота [5].

Библиографический список

1. Иванов, А. И. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных [Текст]: учеб. пособие / А. И. Иванов. — М-во сел. хоз-ва РФ, Башкирский ГАУ. — Уфа: БашГАУ, 2012. — 234 с.

2. Госманов, Р.Г. Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник / Р. Г. Госманов, Н. М. Колычев, В. И. Плешакова — СПб.: Лань, 2010. — 482 с.

3. Петрянкин, Ф.П. Болезни молодняка животных [Текст]: учебное пособие / Ф.П. Петрянкин, О.Ю. Петрова. — СПб.: Лань, 2014. — 352 с.

4. Барышников, П.И. Лабораторная диагностика вирусных болезней животных: учебное пособие / П.И. Барышников, В.В. Разумовская. — СПб.: Лань, 2015. — 672 с.

5. Белоусова, Р. В. Ветеринарная вирусология [Текст]: учебник / Р. В. Белоусова, Э. А. Преображенская, И. В. Третьякова; под ред. Р. В. Белоусовой; Международная ассоциация «Агрообразование». — М.: КолосС, 2007. — 423 с.

источник

Автор работы: Пользователь скрыл имя, 09 Мая 2012 в 20:13, контрольная работа

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота(пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит телят)- острая вирусная болезнь, характеризующаяся поражением слизистых оболочек дыхательных путей, пищеварения и коньюктивитами. Распространена во многих странах Европы, в Японии и США, зарегистрирована в России.

Введение
Возбудитель аденовирусной инфекции КРС
Характеристика
Антигенная вариабельность
Антигенная структура
Гемагглютинирующие свойства
Онкогенные свойства
Устойчивость к физико-химическим воздействиям
Культивирование
Эпизоотология
Локализация вируса
Источники возбудителя
Экспериментальная инфекция
Характеристика аденовирусной инфекции КРС
Патогенез
Течение и клинические проявления
Патологоанатомические изменения
Диагностика аденовирусной инфекции КРС
Диагностика
Взятие и подготовка патологического материала
Лабораторная диагностика
Ретроспективная диагностика
Особенности иммунитета
Иммунитет и специфическая профилактика
Лечение
Профилактика и меры борьбы
Заключение

    1. Введение
    2. Возбудитель аденовирусной инфекции КРС
        • Характеристика
        • Антигенная вариабельность
        • Антигенная структура
        • Гемагглютинирующие свойства
        • Онкогенные свойства
        • Устойчивость к физико-химическим воздействиям
        • Культивирование
      1. Эпизоотология
          • Локализация вируса
          • Источники возбудителя
          • Экспериментальная инфекция
        1. Характеристика аденовирусной инфекции КРС
            • Патогенез
            • Течение и клинические проявления
            • Патологоанатомические изменения
          1. Диагностика аденовирусной инфекции КРС
              • Диагностика
              • Взятие и подготовка патологического материала
              • Лабораторная диагностика
              • Ретроспективная диагностика
            1. Особенности иммунитета
                • Иммунитет и специфическая профилактика
                • Лечение
                • Профилактика и меры борьбы
              1. Заключение

              Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота (пневмония телят, аденовирусный пневмоэнтерит телят) — острая вирусная болезнь, характеризующаяся поражением слизистых оболочек дыхательных путей, пищеварения и коньюктивитами. Распространена во многих странах Европы, в Японии и США, зарегистрирована в России.

              Впервые вирус был изолирован Клейном в 1959г. (США)

              Возбудитель относится к семейству Adenoviridae ДНК-содержащих вирусов, которое включает аденовирусы человека, животных, в том числе птиц, и состоит из двух родов: Mastadenovirus— аденовирусы млекопитающих и Aviadenovirus— аденовирусы птиц. Род Mastadenovirus включает всебя 10 серотипов КРС, условно делящихся на две подгруппы. Серотипы 1,2,3 относятся к первой подгруппе, т.к. по антигенным и биологическим свойствам ближе к аденовирусам человека. Вирионы вируса представляют собой лишенный суперкапсидной оболочки двенадцатигранник кубической симметрии диаметром 70-90 нм. Каждый вирион состоит из 252 капсомеров (240-гексоны, 12-пентоны). Геном содержит одну линейную молекулу двуспиральной ДНК.

              Антигенная вариабельность. Все 10 серотипов аденовирусов КРС на основании общих комплементсвязывающего и прецепитирующего антигенов, выявляют в РСК, РДП и РИФ. Серотипы первой подгруппы (1,2,3) по антигенным и биологическим свойствам ближе к аденовирусам человека.

              Антигенная структура. Различают антигены вируса трех видов: А, В, С. Антиген А (связан с гексонами)-группоспецифичен, стимулирует образование группоспецифических комплементсвязывающих, преципитирующих антител, реагирующих в реакции РНГА, а так же вируснейтрализующих антител против гомологичного вируса.Антиген В (связан с пентонами)— белковый компонент, токсичный фактор ответственный за образование ЦПЭ.Антиген С (связан с нитевидными структурами капсида вируса)- типоспецифичен, стимулирует выработку антител в реакциях РН и РТ ГА.

              Гемагглютинирующая активность аденовирусов зависит от серотипа, вида и концентрации эритроцитов, температуры и рН среды. Обычно штаммы аденовирусов 1-го и 2-го серотипов агглютинируют эритроциты белых крыс, у штаммов 3-5-х серотипов это свойство проявляется только после концентрирования, а штаммы 6-9-х серотипов – негемагглютинирующие. Гемадсорбирующие свойства не установлены.

              Онкогенными свойствами обладают аденовирусы 3-го серотипа при введении их новорождённым хомячкам внутрибрюшинно, подкожно, в грудную полость и интрацеребрально. Опухоль развивается через 24-67 дн.

              Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Аденовирусы весьма устойчивы. Повторное замораживание и оттаивание возбудителя не снижают его инфекционности. Прогревание в течение 30. 60 мин при температуре 50, 56 и 60°С не инактивирует аденовирус, но некоторые серотипы утрачивали инфекционность. Аденовирусы устойчивы к рН от 3,0 до 9,0 в течение 3 ч, ультрафиолетовым лучам — в течение 30. 60 мин; при температуре от 4 °С — не более 90 дней; 20°-22 °С — от 1 до 4 месяцев; 36 °С — от 15 до 60 дней. В 0,1-0,3%-ном растворе этилового спирта или формалина аденовирус погибает в течение нескольких минут. Длительно сохраняется в лиофилизированном состоянии (5 лет).

              Культивирование. Для культивирования аденовирусов КРС используют:

                • почки эмбриона коровы (ПЭК)
                • тестикулы бычка (ТБ)
                • легкие эмбриона коровы (ЛЭК)
                • почки теленка Таурус-1 (Т-1)

              Вирус размножается в культуре ткани клеток крупного рогатого скота, вызывая цитопатогенное действие (ЦПД), которое характеризуется специфической дегенерацией клеток зараженного монослоя, начиная с периферии. Клетки округляются и собираются в гроздевидные конгломераты. Цитопатический эффект сопровождается образованием внутриядерного включения неправильной округлой формы у серотипов первой подгруппы и множественных внутриядерных включений правильной округлой формы- второй подгруппы. Аденовирусы КРС не размножаются в куриных эмбрионах и непатогенны для лабораторных животных, кроме некоторых онкогенных штаммов (3 серотипа), которые вызывают опухоли у новорожденных хомячков.

              Локализация вируса. От клинически больных животных вирус изолируют из проб с конъюнктивы, носовой полости, миндалин, из крови и фекалий, а так же из паренхиматозных органов и лимфатических узлов.

              Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие животные, выделяющие вирус с истечениями из носа и фекалиями. Факторы передачи возбудителя — корма, вода, подстилка, предметы ухода, загрязненные выделениями больных животных. Заражение происходит воздушно-капельным и алиментарным путями, а также через конъюнктиву. Заболеваемость телят составляет 50. 80%, летальность — 15. 60%. Болезнь широко распространена в районах интенсивного животноводства. Наблюдается латентное вирусоносительство, которое подтверждается выделением вируса из ткани почек, тестикул и крови здоровых животных.

              Чаще болеют телята от 2-недельного до 4-месячного возраста. Болезнь регистрируется в зимне-весенние месяцы при комплектовании хозяйств.

              Экспериментальная инфекция воспроизводится на телятах 15-30-дневного возраста и проявляется пневмоэнтеритами при явлениях общей слабости, летальность может достигать 60%. У животных старшего возраста болезнь протекает хронически.

              В организме аденовирус первично локализуется в органах респираторного тракта, размножается в лимфоидных органах, затем проникает в кровь, легкие, органы пищеварения, центральную нервную систему и поражает их. Вирусные респираторные болезни телят сопровождаются иммунодефицитными состояниями.

              Течение и клиническое проявление болезни.

              Инкубационный период болезни 4-7 дней. Течение болезни зависит от условий содержания, кормления и возраста животных. Сначала появляются слезотечение и слизистые носовые истечения, которые переходят в течение 3- 5 дней в гнойные. У телят снижается аппетит, учащаются пульс и дыхание, появляются депрессия, сухой кашель. С 2-3-х суток заболевания у телят развиваются тимпания и диарея. На 3-4 день повышается температура тела до 41,5 «С и удерживается до 6-9 дней. Диарея длится несколько дней иногда с примесью крови. Летальность составляет 40-60 %. У животных старшего возраста болезнь часто преобретает хроническое течение. Таким образом для аденовирусной инфекции характерно преобладание респираторного, коньюктивального или кишечного синдромов.

              • При вскрытии отмечают гастроэнтерит катарально-геморрагического типа, увеличение печени, изменения в органах дыхания (ателектаз, уплотнение, эмфизема, пневмония), дегенерацию лимфатической системы (лимфатические узлы увеличены, отечны, анемичны).
              • При гистологическом исследовании в эндотелиальных клетках сосудов селезенки, печени, почек, слизистой оболочки желудка и кишечника, лимфатических узлов и сердца обнаруживают внутриядерные включения.

              Диагностика аденовирусной инфекции КРС.

              Диагноз устанавливают комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

              Взятие и подготовка материала.

              В лабораторию отправляют патологический материал от больных животных, взятый в первые 2-3- дня болезни при выраженной клинической картине или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания.

                • От больных животных берут: смывы со слизистых оболочек носа, глаз, прямой кишки с помощью стерильного ватно-марлевого тампона, помещенного в физиологический раствор или раствор Хенкса; кровь в первые 3 дня заболевания (не менее чем от 10 животных) и через 3 недели от тех же животных (для получения парных сывороток)
                • От животных убитых с диагностической целью, берут кусочки легких, селезенки, слизистые оболочки носовой полости, трахеи, кишечника, региональные лимфатические узлы и затем помещают в стерильную посуду.

              Патологический материал доставляют в лабораторию в термосе с охлаждающей смесью и сопроводительным документом. В лаборатории флаконы с тампонами встряхивают, отжимают и удаляют а содержимое центрифугируют. Надосадочную жидкость используют для выделения вируса, а из осадка клеток делают мазки для РИФ. Из кусочков органов убитого животного готовят мазки-отпечатки для РИФ и 10%-ную суспензию вируса для его выделения.

              Лабораторная диагностика включает:

              1) индикацию, т.е. обнаружение антигена в патологическом материале (мазках-отпечатках, срезах) в реакциях иммунофлуоресценции (РИФ), связывания комплемента (РСК), ИФА, реакции диффузной преципитации (РДП). В РИФ используют флуоресцирующие антитела (из диагностических наборов) к вирусам ПГ-3, ВД, ИРТ, РС, аденовирусам первой и второй подгрупп. Кроме того для индикации аденовируса проводят обнаружение в мазках отпечатках внутриядерных телец включений. Для обнаружения вирусной нуклеиновой кислоты в смывах и фекалиях используют ДНК-зонд, разрабатывают ПЦР.

              2) изоляцию, т.е. выделение вирусов проводят в первично-трипсинизированных культурах клеток эмбрионов КРС (почки, легкие) и тестикул бычка. В последние годы чаще используют перевиваемые линии клеток (почки, легкие), довольно успешно выделяют вирусы на перевиваемой культуре клеток почки теленка (Т-1). Зараженные и контрольные культуры клеток инкубируют при 37-38ºС до 7-14 дней, ежедневно просматривая под микроскопом для выявления цитопатического действия. Специфические изменения в клетках, зараженных аденовирусами, начинаются с периферии монослоя, который разрывается, клетки округляются и собираются в конгломераты, похожие на грозди винограда. ЦПД сопровождается образованием внутриядерных включений.

              Изолят считают выделенным, при стабильном однотипичном ЦПД не менее чем в трех последовательных пассажах. При отсутствии ЦПД в трех пассажах проводят четвертый пассаж с целью выявления аденовируса в монослойной культуре клеток на покровных стеклышках методом РИФ. При отрицательной реакции выделение вируса прекращают.

              Выделение вирусов на лабораторных естественно-восприимчивых животных и куриных эмбрионах не применяют.

              3) идентификацию, т.е. обнаружение выделенного вируса, проводят в серологических реакциях: РИФ, РСК. РДП, РН, РТГА. Чаще всего используют РИФ с двумя флуоресцирующими сыворотками, соответствующим двум подгруппам (первой и второй). Типирование аденовирусов осуществляют в научно-исследовательских учреждениях, имеющих типоспецифичные сыворотки и вирусы 10 типов аденовирусов. Для этой цели используют РН, а если выделенный вирус обладает гемагглютинирущей активностью, ставят классический РТГА.

              При дифференциальной диагностике необходимо исключить парагрипп-3, респираторно-синцитиальную инфекцию, инфекционный ринотрахеит, вирусную диарею, коронавирусную и парвови-русную инфекции, микоплазмоз, хламидиоз, пастереллез, сальмонеллез. Кроме того аденовирусная инфекция часто протекает в ассоциации с вышеперечисленными болезнями, что обуславливает необходимость правильной постановки лабораторных исследований.

              Ее проводят с целью обнаружения специфических антител в сыворотке крови переболевших животных в РНГА, ИФА, непрямой РИФ, РСК и РДП, используя парные сыворотки крови, взятые в первые 2-3 сут. болезни и через 2-4 нед. Диагностическое значение имеют обнаружение 4-кратного и большего нарастания титра антител во второй сыворотке переболевшего животного и увеличение серопозитивных проб.

              источник